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龍圖騰網(wǎng)恭喜上海水大技術(shù)轉(zhuǎn)移有限公司申請(qǐng)的專(zhuān)利低溫脅迫生物模型和構(gòu)建方法及其應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN119744811B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-30發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為：202510265178.7，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/85；該發(fā)明授權(quán)低溫脅迫生物模型和構(gòu)建方法及其應(yīng)用是由陳良標(biāo);胡瑞芹;劉洋;李瑋;鄒路芳;江守文;吳智超;黃松錢(qián)設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2025-03-07向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。

本低溫脅迫生物模型和構(gòu)建方法及其應(yīng)用在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及低溫脅迫生物模型和構(gòu)建方法及其應(yīng)用。本研究通過(guò)同源重組技術(shù)，成功構(gòu)建表達(dá)NPAFP蛋白的低溫脅迫小鼠模型，并利用CAG啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)NPAFP蛋白在小鼠體內(nèi)的穩(wěn)定表達(dá)。這些轉(zhuǎn)基因小鼠將作為研究NPAFP蛋白在哺乳動(dòng)物體內(nèi)功能的基礎(chǔ)，特別是在低溫脅迫下的生理反應(yīng)及機(jī)制探究。通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)NPAFP蛋白的低溫脅迫羅非魚(yú)模型，提高羅非魚(yú)在低溫環(huán)境下的存活率，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供新的解決方案。通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)NPAFP蛋白的低溫脅迫斑馬魚(yú)模型，進(jìn)一步探索NPAFP在水生生物中的抗寒功能，并對(duì)其在低溫脅迫及氧化應(yīng)激防護(hù)中的潛力進(jìn)行驗(yàn)證。

本發(fā)明授權(quán)低溫脅迫生物模型和構(gòu)建方法及其應(yīng)用在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.一種低溫脅迫小鼠模型制備方法，所述低溫脅迫小鼠模型通過(guò)基因編輯技術(shù)，將構(gòu)建的表達(dá)NPAFP蛋白的質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠體內(nèi)，得到穩(wěn)定遺傳并表達(dá)NPAFP蛋白的雜合子和純合子個(gè)體；所述NPAFP蛋白選自NPAFP1、NPAFP2、NPAFP3或NPAFP4；所述NPAFP1、NPAFP2、NPAFP3和NPAFP4的DNA序列分別如SEQIDNO.1~4所示；所述制備方法包括如下步驟：1構(gòu)建質(zhì)粒：利用CAG啟動(dòng)子構(gòu)建表達(dá)NPAFP的Donorvector質(zhì)粒；2構(gòu)建特異性引物：在H11插入位點(diǎn)的5’端和3’端，以及H11插入位點(diǎn)的上下游區(qū)域設(shè)計(jì)針對(duì)NPAFP基因的特異性引物；3顯微注射：將（1）中樣品顯微注射到C57BL6JGpt背景的小鼠受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕雌鼠體內(nèi)，待其懷孕產(chǎn)仔；4基因型鑒定：受體鼠生出的F0代小仔在5-7天剪尾及剪腳趾編號(hào)，提取基因組DNA進(jìn)行PCR和測(cè)序鑒定，對(duì)小鼠進(jìn)行基因型鑒定；5NPAFP基因功能揭示：利用陽(yáng)性F1代小鼠進(jìn)行自交，獲得同胞的3月齡雜合子和WT小鼠，進(jìn)一步研究揭示NPAFP基因的功能；6獲得具有NPAFP功能的模型即為低溫脅迫小鼠模型。

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