恭喜安徽大學王喜慶獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜安徽大學申請的專利一種脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體及其在γ-內酯制備中的應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN117467631B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-05-06發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202311303268.8,技術領域涉及:C12N9/08;該發明授權一種脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體及其在γ-內酯制備中的應用是由王喜慶;王帥寧;房偉;肖亞中設計研發完成,并于2023-10-10向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體及其在γ-內酯制備中的應用在說明書摘要公布了:本發明公開了一種脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體及其在γ?內酯制備中的應用,其中脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體是由野生型P450BSβ的氨基酸序列在第78位、85位、173位和290位突變得到的,可以利過氧化氫為直接的電子供體,脂肪酸為底物直接一步氧化內酯化為內酯。催化的底物范圍擴展為鏈長為C6~C18鏈長的脂肪酸,含官能團的脂肪酸,含芳香雜環的脂肪酸。本發明所述的催化劑效率更高、反應更簡潔、底物范圍更廣,在制備γ?內酯方面具有良好的應用前景和工業價值。
本發明授權一種脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體及其在γ-內酯制備中的應用在權利要求書中公布了:1.一種脂肪酸脫羧酶P450BSβ突變體,其特征在于通過包括如下步驟的方法制備獲得:步驟1:構建表達脂肪酸脫羧酶P450BSβ的質粒將SEQIDNO:2所示的核苷酸序列經酶切重組到表達載體pET28a上;步驟2:將步驟1構建的表達脂肪酸脫羧酶P450BSβ的質粒轉化到大腸桿菌中;步驟3:脂肪酸脫羧酶P450BSβ的表達將步驟2得到的菌種在LB液體培養基中過夜培養,然后加入TB液體培養基中擴培,于對數期后期加入血紅素前體δ-氨基乙酰丙酸和IPTG誘導表達后,離心收菌;步驟4:含有脂肪酸脫羧酶P450BSβ的細胞裂解液的制備用緩沖液將步驟3得到的菌體重懸,通過超聲破碎裂解細胞,離心,獲得上清液;步驟5:脂肪酸脫羧酶P450BSβ的純化將步驟4獲得的上清液加入事先預處理的鎳離子親和柱,使帶有His標簽的目的蛋白與鎳柱結合,然后于較低咪唑濃度下除去雜蛋白,最后用含有高濃度咪唑的緩沖液將目的蛋白洗脫;步驟6:將洗脫下來的目的蛋白透析以除去咪唑,蛋白經濃縮后凍干制成凍干粉,測定目的蛋白濃度后,-80℃保存。
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