中國科學院大連化學物理研究所張麗華獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉中國科學院大連化學物理研究所申請的專利一種SARS-CoV-2 S1蛋白的檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116148365B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202111395695.4,技術領域涉及:G01N30/02;該發明授權一種SARS-CoV-2 S1蛋白的檢測方法是由張麗華;周雯;隨志剛;劉健慧;賀映云;袁輝明;趙寶鋒;楊開廣;張玉奎設計研發完成,并于2021-11-23向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種SARS-CoV-2 S1蛋白的檢測方法在說明書摘要公布了:本發明涉及一種SARS?CoV?2S1蛋白的檢測方法。在該方法中,將SARS?CoV?2S1蛋白用溶液酶解的預處理方式獲得S1肽段,利用C18色譜柱實現樣品分離,再用orbitrap高分辨質譜進行數據采集。先在質譜的數據依賴性模式DDA下進行S1肽段樣品的數據采集,挑選出6?10條高強度、肽段匹配譜圖數PSM較多的特異性肽段,構建出平行反應監測模式PRM的肽段庫;最后根據構建的PRM肽段庫進行SARS?CoV?2S1蛋白的鑒定。該技術能夠實現SARS?CoV?2S1蛋白的高靈敏度、高精確度檢測,有望成為核酸檢測在人體微量病毒檢測和貨物表面微量病毒檢測中的重要補充方法,在遏制SARSCOV?2的傳播中發揮重要作用。
本發明授權一種SARS-CoV-2 S1蛋白的檢測方法在權利要求書中公布了:1.一種SARS-CoV-2S1蛋白的檢測方法,其特征在于:包括以下步驟:(1)利用離心破裂SARS-CoV-2病毒顆粒,再用甲酸和乙腈進行蛋白質提取,最后通過尺寸排阻色譜進行S1蛋白的純化;(2)利用溶液酶解的方法,進行蛋白質樣品預處理;(3)利用C18色譜柱實現樣品分離,再用orbitrap高分辨質譜進行數據采集;(4)利用DDA模式挑選出特異性肽段,構建出PRM模式的肽段庫;(5)利用構建的PRM模式的肽段庫進行待分析肽段樣品的SARS-CoV-2S1蛋白的鑒定;步驟(4)過程為:從Uniprot里下載SARS-CoV-2蛋白的全部序列,選取其中從13–685位的氨基酸序列,即為S1蛋白序列;通過軟件pFind自動添加入污染物庫,即為構建的蛋白質數據庫;將SARS-CoV-2S1肽段樣品上樣至液質聯用,經過梯度分離后,采用DDA模式進行數據采集,FullMS掃描在Orbitrap上實現;在采集周期內,按強度從高至低將2-7價母離子進行二級譜碎裂,獲得質譜的原始數據文件;以構建的蛋白質數據庫為數據檢索庫,將質譜采集的原始文件采用軟件ProteomeDiscoverer和Maxquant進行數據檢索;根據鑒定到的肽段,選取強度和PSM數都在前12名的6-10條高強度、PSM數較多的SARS-CoV-2S1蛋白的特異性肽段,構建出PRM模式的肽段庫;步驟(5)所述的PRM模式的肽段庫包括:DIADTTDAVR,SWmESEFR,GWIFGTTLDSK,FASVYAWNR,HTPINLVR,VGGNYNYLYR,NIDGYFK,QIAPGQTGK。
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