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龍圖騰網(wǎng)恭喜中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所(中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心)申請(qǐng)的專利抗ALV-J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系及其構(gòu)建方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115595327B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-15發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202110721143.1，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/12；該發(fā)明授權(quán)抗ALV-J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系及其構(gòu)建方法是由高玉龍;王笑梅;祁小樂;劉長(zhǎng)軍;張艷萍;潘青設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2021-06-28向國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本抗ALV-J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系及其構(gòu)建方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種抗ALV?J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系及其構(gòu)建方法。本發(fā)明利用CRISPRCas9方法和流式細(xì)胞術(shù)篩選，將ALV?J細(xì)胞受體chNHE1基因的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)V33進(jìn)行突變以及W38進(jìn)行缺失，同時(shí)為了便于后期基因編輯結(jié)果的鑒定，對(duì)其編碼的第34?37位氨基酸密碼子進(jìn)行同義替換。結(jié)果表明，含有W38位點(diǎn)缺失及V33位點(diǎn)突變的替換序列可高效定點(diǎn)替換chNHE1基因的相應(yīng)序列，chNHE1基因編輯細(xì)胞系可在不影響細(xì)胞增殖水平的條件下抵抗ALV?J的感染。本發(fā)明通過對(duì)chNHE1作為ALV?J受體的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的突變，建立了高效的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系的構(gòu)建方法，為進(jìn)一步研究chNHE1基因的功能奠定了基礎(chǔ)。

本發(fā)明授權(quán)抗ALV-J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系及其構(gòu)建方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種構(gòu)建抗ALV-J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系的方法，其特征在于，包括以下步驟：1載體構(gòu)建合成chNHE1敲除引導(dǎo)RNA序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，將該序列插入到pMD-18T載體，構(gòu)建chNHE1-sgRNA敲除質(zhì)粒；合成ssOND序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；2r-chNHE1細(xì)胞系的構(gòu)建及篩選將pCas9-GFP質(zhì)粒、chNHE1-sgRNA質(zhì)粒及ssOND共轉(zhuǎn)入DF1細(xì)胞內(nèi)，培養(yǎng)48h后，使用流式細(xì)胞分選儀篩選帶有GFP熒光的細(xì)胞，按照5個(gè)細(xì)胞孔的稀釋比例將其接入96孔板中，7d后于光學(xué)顯微鏡下觀察篩選單克隆細(xì)胞系并擴(kuò)大培養(yǎng)，使用基因組提取試劑盒提取r-chNHE1細(xì)胞系的基因組，以P1和P3為引物，鑒定是否突變成功，以P2和P3為引物鑒定r-chNHE1單克隆細(xì)胞中是否存在未成功突變的chNHE1基因序列；以chNHE1-CX-F及chNHE1-CX-R為引物擴(kuò)增替換序列，回收擴(kuò)增產(chǎn)物連接pMD-18T進(jìn)行測(cè)序鑒定；P1：CGCGTGGATCGGAACCGACGP2：CGCGTGTCTCCGAGCCCACCP3：GTTCAGCGGGTGCACCTCCTchNHE1-CX-F：CCCTTCCCTGGGCTCTGCTGCchNHE1-CX-R：TGTTCAGCGGGTGCACCTCC鑒定正確的單克隆細(xì)胞系即為抗ALV-J的雞chNHE1基因編輯細(xì)胞系。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實(shí)施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請(qǐng)人或?qū)＠麢?quán)人中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所(中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心)，其通訊地址為：150009 黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)馬端街427號(hào)；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。