恭喜福建農林大學顧連峰獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜福建農林大學申請的專利竹花葉病毒介導的外源表達系統及其應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116042701B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-06-13發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310105479.4,技術領域涉及:C12N15/83;該發明授權竹花葉病毒介導的外源表達系統及其應用是由顧連峰;王柏杰;包明川;金炎冬;張航曉;趙良真設計研發完成,并于2023-02-13向國家知識產權局提交的專利申請。
本竹花葉病毒介導的外源表達系統及其應用在說明書摘要公布了:本發明提供了一種竹花葉病毒介導的外源表達系統及其應用,屬于基因工程技術領域。所述外源基因表達系統的元件包括竹花葉病毒基因組、pCAMBIA1302線性化載體、ORF5亞基因組啟動子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和農桿菌GV3101。該過表達體系能夠被應用于毛竹和麻竹基因功能研究,可為竹類分子育種提供科學指導。
本發明授權竹花葉病毒介導的外源表達系統及其應用在權利要求書中公布了:1.一種竹花葉病毒介導的外源基因表達系統,其特征在于:所述外源基因表達系統的元件包括竹花葉病毒基因組、pCAMBIA1302線性化載體、ORF5亞基因組啟動子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和農桿菌GV3101; 所述外源基因表達系統的構建方法包括以下步驟: 1)提取受竹花葉病毒侵染的麻竹總RNA,對提取的總RNA進行反轉錄得到cDNA,以反轉錄得到的cDNA為模板PCR擴增獲得竹花葉病毒的全長基因組序列; 2)采用限制性內切酶XhoⅠ和SpeⅠ雙酶切pCAMBIA1302載體,獲得pCAMBIA1302線性化載體,將2×35s啟動子驅動的竹花葉病毒的全長基因組序列與pCAMBIA1302線性化載體連接,得到pCAMBIA1302-BaMV載體; 3)將ORF5亞基因組啟動子序列插入到pCAMBIA1302-BaMV載體的ORF4和ORF5序列之間,再將RNA沉默抑制子P19序列和T2A自剪切肽序列依次連接并克隆到pCAMBIA1302-BaMV載體的SacⅠ酶切點,得到重組病毒載體; 4)將外源基因與步驟3)獲得的重組病毒載體連接,再轉入農桿菌GV3101感受態細胞中,得到竹花葉病毒介導的外源基因表達系統;RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因依次位于重組病毒載體的ORF4和ORF5之間; 所述竹花葉病毒的全長基因組的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示,所述ORF5亞基因組啟動子的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示,所述RNA沉默抑制子P19的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,所述T2A自剪切肽的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示; 所述外源基因包括EGFP基因或RUBY基因。
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