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龍圖騰網(wǎng)恭喜深圳華大基因科技服務(wù)有限公司申請(qǐng)的專利擴(kuò)增或者檢測(cè)含有全長(zhǎng)poly(A)的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組cDNA的方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115181790B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-06-10發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202110368885.0，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6869；該發(fā)明授權(quán)擴(kuò)增或者檢測(cè)含有全長(zhǎng)poly(A)的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組cDNA的方法是由唐沖;謝哲;陳智超;郭梅;甕喆設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2021-04-06向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本擴(kuò)增或者檢測(cè)含有全長(zhǎng)poly(A)的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組cDNA的方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種擴(kuò)增或者檢測(cè)含有全長(zhǎng)polyA的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組cDNA的方法。所述方法包括：1單細(xì)胞反應(yīng)制備；2末端延伸：以帶PolydT的10×barcodedgelbeads為模板，使帶polyA的轉(zhuǎn)錄本末端延伸得單鏈的產(chǎn)物1；3模板置換：對(duì)所述產(chǎn)物1進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，在反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物后的3’末端添加3個(gè)堿基C；并添加TSO引物進(jìn)行反應(yīng)得產(chǎn)物2；4PCR擴(kuò)增：對(duì)所述產(chǎn)物2進(jìn)行PCR擴(kuò)增。本發(fā)明提高了對(duì)單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組的建庫(kù)通量，彌補(bǔ)了目前單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組檢測(cè)不能檢測(cè)全長(zhǎng)polyA的技術(shù)空白。

本發(fā)明授權(quán)擴(kuò)增或者檢測(cè)含有全長(zhǎng)poly(A)的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組cDNA的方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種基于10Xgenomics單細(xì)胞平臺(tái)擴(kuò)增或者檢測(cè)含有全長(zhǎng)polyA的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組cDNA的方法，其特征在于，所述方法包括：（1）單細(xì)胞反應(yīng)制備；其包括a）制備單細(xì)胞懸液；b）配制Mastermix；c）將a）和b）混勻，得混勻液并制備液滴；其中所述Mastermix包括dNTP、無(wú)5’-3’外切酶活性的DNA聚合酶和緩沖液，所述緩沖液包括50mMNaCl、10mMTris-HCl、10mMMgCl2和1mMDTT；（2）末端延伸：以帶PolydT的10×barcodedgelbeads為模板，使帶polyA的轉(zhuǎn)錄本末端延伸得單鏈的產(chǎn)物1；（3）模板置換：對(duì)所述產(chǎn)物1進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，在反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物后的3’末端添加3個(gè)堿基C；并添加TSO引物進(jìn)行反應(yīng)得產(chǎn)物2；（4）PCR擴(kuò)增：對(duì)所述產(chǎn)物2進(jìn)行PCR擴(kuò)增；在步驟（3）之前對(duì)步驟（2）所得產(chǎn)物進(jìn)行樣品純化和引物消化；所述引物消化包括：1）在純化產(chǎn)物管內(nèi)加入等量ExonucleaseI和RNase抑制劑，再加入10×NEBbuffer2放置在37℃反應(yīng)；2）取1.8倍體積的室溫RNACleanXPBeads加入PCR產(chǎn)物中并充分混勻，室溫孵育；3）靜置2-5min至液體澄清，棄掉上清；加入等倍體積的80%乙醇，室溫靜置后棄去上清；4）重復(fù)步驟3），棄上清并將管底液體盡量吸干；5）室溫干燥，使磁珠表面無(wú)反光、無(wú)開裂；6）加入TE進(jìn)行cDNA洗脫，移液器吹打混勻并室溫下溶解；7）將離心管置于磁力架上，靜置至液體澄清，將上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中。

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