買專利賣專利找龍圖騰，真高效！ 查專利查商標用IPTOP,全免費！專利年費監(jiān)控用IP管家,真方便！

龍圖騰網(wǎng)恭喜廣東省中醫(yī)院(廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院、廣東省中醫(yī)藥科學院)申請的專利原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型制備方法及試劑盒獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN117305221B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-06發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202311253354.2，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N5/071；該發(fā)明授權(quán)原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型制備方法及試劑盒是由吳壽海;曾湘;毛煒;黎創(chuàng);徐鵬;盧釗宇;田瑞敏設計研發(fā)完成，并于2023-09-26向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型制備方法及試劑盒在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開一種原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型的制備方法及試劑盒。本發(fā)明利用含核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的gRNA和Cas9基因的gRNA?Cas9質(zhì)粒，以及核苷酸序列如SEQIDNO.2～7所示的引物，基于CRISPRCas9基因同源修復技術(shù)構(gòu)建了含SLC2A9rs16890979的多能干細胞，并將其分化為腎類器官，制得了一種原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型。通過本發(fā)明的方法制得的腎類器官可實現(xiàn)尿酸代謝異常的表型及功能模擬，可作為體外研究尿酸代謝性腎損傷的發(fā)病機制及藥物篩選的良好的腎類器官模型。

本發(fā)明授權(quán)原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型制備方法及試劑盒在權(quán)利要求書中公布了：1.原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：（1）構(gòu)建用于擴增含SLC2A9rs16890979的修復模板的PCR模板：以胚胎干細胞的DNA為模板，分別以核苷酸序列如SEQIDNO.4~5所示的序列和核苷酸序列如SEQIDNO.6~7所示的序列為引物進行PCR，分別得到上游同源臂和下游同源臂；將上游同源臂和下游同源臂與載體連接，即得用于擴增含SLC2A9rs16890979的修復模板的PCR模板；（2）構(gòu)建含SLC2A9rs16890979的修復模板：以步驟（1）制得的PCR模板為模板，以核苷酸序列如SEQIDNO.2~3所示的序列為引物進行PCR，得到含SLC2A9rs16890979的修復模板；（3）構(gòu)建含SLC2A9rs16890979的胚胎干細胞：將gRNA-Cas9質(zhì)粒和含SLC2A9rs16890979的修復模板共同轉(zhuǎn)染胚胎干細胞，對轉(zhuǎn)染后的細胞進行抗性篩選，然后敲除抗性標記基因，選擇存在SLC2A9rs16890979突變的單克隆細胞進行擴大培養(yǎng)，分別得到存在SLC2A9rs16890979雜合突變和純合突變的胚胎干細胞；其中，所述gRNA-Cas9質(zhì)粒和含SLC2A9rs16890979的修復模板的摩爾比為1:2~5；所述gRNA-Cas9質(zhì)粒含靶向SLC2A9rs16890979基因突變點的gRNA和Cas9基因，所述gRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；（4）原發(fā)性尿酸代謝異常腎類器官模型的制備：包括如下步驟：（i）將步驟（3）制得的存在SLC2A9rs16890979突變的胚胎干細胞消化后用含3.0~3.5mMY27632、5~10μMCHIR99021和0.1~2mMβ-巰基乙醇的BPEL培養(yǎng)基重懸，然后接種在超低濃度附著板中培養(yǎng)；（ii）培養(yǎng)的第2天，用含5~10μMCHIR99021的BPEL培養(yǎng)基替換一半培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)至細胞形成胚狀體；（iii）將胚狀體用DMEM洗滌，然后再懸浮在StageII培養(yǎng)基中培養(yǎng)至其分化腎類器官；所述StageII培養(yǎng)基以由IMDM培養(yǎng)基和Ham’sF-12nutrientmixture按體積比1:1混合得到的培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其組成還包括：10%BSA、3.0~3.5mMY27632、5~10μMCHIR99021、0.1~2mMβ-巰基乙醇、0.5~2%Pencillin-Streptomycin和2~3μgmLPlasmocin。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)＠麢?quán)人廣東省中醫(yī)院(廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院、廣東省中醫(yī)藥科學院)，其通訊地址為：510120 廣東省廣州市越秀區(qū)大德路111號；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。