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龍圖騰網(wǎng)恭喜山大生殖研發(fā)中心有限公司申請的專利分離卵巢中不同種類單細(xì)胞的方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN106085950B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-15發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：201610519416.3，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N5/075；該發(fā)明授權(quán)分離卵巢中不同種類單細(xì)胞的方法是由陳子江;馬金龍;呂躍;趙涵;梁子君;王成棟;路鋼設(shè)計研發(fā)完成，并于2016-07-04向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本分離卵巢中不同種類單細(xì)胞的方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明提供了用于分離哺乳動物早期卵泡獲得單個卵母細(xì)胞和其單個顆粒細(xì)胞的方法。本發(fā)明的方法能夠分離哺乳動物早期卵泡獲得具有活性的單個卵母細(xì)胞及其相應(yīng)顆粒細(xì)胞。本發(fā)明還提供了用于獲得哺乳動物早期卵泡單個卵母細(xì)胞和其單個顆粒細(xì)胞的試劑盒。

本發(fā)明授權(quán)分離卵巢中不同種類單細(xì)胞的方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種獲得哺乳動物的早期卵泡的單個卵母細(xì)胞和其單個顆粒細(xì)胞的方法，其特征在于包括以下步驟：1對哺乳動物卵巢組織進(jìn)行鈍性分離；2將哺乳動物卵巢組織碎塊在37℃下，在第一消化液中消化20-60分鐘，所述第一消化液含有膠原蛋白酶I、膠原蛋白酶II或膠原蛋白酶IV或其混合物；3將步驟2得到的消化液混合物通過第一孔徑細(xì)胞濾網(wǎng)，所述第一孔徑細(xì)胞濾網(wǎng)的孔徑為40-100μm，然后將濾液通過第二孔徑細(xì)胞濾網(wǎng)，所述第二孔徑細(xì)胞濾網(wǎng)的孔徑為8-12μm；4用培養(yǎng)液沖洗第二孔徑細(xì)胞濾網(wǎng)內(nèi)沉淀物，然后用培養(yǎng)液重懸沉淀；5吸出重懸溶液中的單個早期卵泡；6將吸出的單個早期卵泡清洗后，在第二消化液中消化3-10分鐘，所述第二消化液含有胰蛋白酶或Accutase；7將步驟6得到的消化液混合物轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)液中，通過分離得到單個卵母細(xì)胞以及其相應(yīng)單個顆粒細(xì)胞，其中所述早期卵泡為原始卵泡或初級卵泡。

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