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龍圖騰網(wǎng)恭喜暨南大學(xué)申請(qǐng)的專(zhuān)利基于熒光傳感器的鈣蛋白酶活性檢測(cè)方法及應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115356314B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-15發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為：202211019993.8，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N21/64；該發(fā)明授權(quán)基于熒光傳感器的鈣蛋白酶活性檢測(cè)方法及應(yīng)用是由黃峙;李璞;凌欽婕設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-08-24向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。

本基于熒光傳感器的鈣蛋白酶活性檢測(cè)方法及應(yīng)用在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明公開(kāi)了一種基于熒光傳感器的鈣蛋白酶活性檢測(cè)方法及應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物技術(shù)、生物分析和納米材料應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明構(gòu)建了熒光標(biāo)記多肽與納米氧化石墨烯基于FRET的熒光傳感器，將其加入組織或細(xì)胞樣品中，實(shí)現(xiàn)對(duì)了鈣蛋白酶活性進(jìn)行快速靈敏檢測(cè)進(jìn)一步優(yōu)化鈣蛋白酶活性實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)方法。另外，本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，NGO?FSP的細(xì)胞成像效果良好，可以將NGO?FSP熒光傳感體系應(yīng)用于細(xì)胞成像中。

本發(fā)明授權(quán)基于熒光傳感器的鈣蛋白酶活性檢測(cè)方法及應(yīng)用在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.一種基于熒光傳感器的鈣蛋白酶活性檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟：（1）將納米氧化石墨烯和熒光標(biāo)記多肽混合，得到NGO-FSP熒光傳感器；（2）將待測(cè)樣品與步驟（1）的NGO-FSP熒光傳感器混合，孵育后檢測(cè)熒光強(qiáng)度，即可確定待測(cè)樣品中鈣蛋白酶的活性；步驟（1）中所述的熒光標(biāo)記多肽是通過(guò)將異硫氰酸熒光素標(biāo)記在CAPN特異性酶切底物多肽N端得到的；步驟（1）中所述的納米氧化石墨烯的片徑大小為50～200nm，比表面積為50～100m2g；所述的多肽為硒蛋白K的N端一段含有calpain2酶切位點(diǎn)的序列，其氨基酸序列為：RRMGRISHLRGPSPPPMAGG，分子量為2130.49Da；所述的異硫氰酸熒光素的激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為520nm；步驟（1）中所述的納米氧化石墨烯在體系中的濃度為1μgmL；步驟（1）中所述的熒光標(biāo)記多肽在體系中的濃度為0.2μM；步驟（1）中所述的混合為在熒光標(biāo)記多肽溶液中加入納米氧化石墨烯吹打混勻；所述的熒光標(biāo)記多肽溶液為以水作為溶劑；步驟（2）中所述的待測(cè)樣品包括細(xì)胞、組織、或細(xì)胞組織經(jīng)過(guò)總蛋白提取步驟后獲得的上清液中的至少一種；步驟（2）中所述的待測(cè)樣品的體系中不含Ca2+時(shí)，還需加入鈣蛋白酶緩沖液，以滿足calpain2酶切的環(huán)境條件；步驟（2）中所述的孵育的時(shí)間為40～60min；步驟（2）中所述的孵育的溫度為35～40℃；步驟（2）中所述熒光強(qiáng)度為采用包括酶標(biāo)儀、熒光分光光度計(jì)或激光共聚焦顯微鏡中的至少一種進(jìn)行檢測(cè)；所述的步驟（1）和步驟（2）全程均在避光的條件下進(jìn)行。

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