恭喜重慶第二師范學(xué)院趙欣獲國(guó)家專(zhuān)利權(quán)
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龍圖騰網(wǎng)恭喜重慶第二師范學(xué)院申請(qǐng)的專(zhuān)利小鼠血栓的檢測(cè)方法及植物乳桿菌對(duì)血栓形成的抑制作用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán),本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予,授權(quán)公告號(hào)為:CN115290872B 。
龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-03-21發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉:該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為:202210220598.X,技術(shù)領(lǐng)域涉及:G01N33/50;該發(fā)明授權(quán)小鼠血栓的檢測(cè)方法及植物乳桿菌對(duì)血栓形成的抑制作用是由趙欣設(shè)計(jì)研發(fā)完成,并于2022-03-08向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。
本小鼠血栓的檢測(cè)方法及植物乳桿菌對(duì)血栓形成的抑制作用在說(shuō)明書(shū)摘要公布了:本發(fā)明提供小鼠血栓的檢測(cè)方法及植物乳桿菌對(duì)血栓形成的抑制作用,屬于血栓治療領(lǐng)域,該小鼠血栓的檢測(cè)方法具體步驟為材料與試劑,儀器與設(shè)備,動(dòng)物實(shí)驗(yàn),凝血四項(xiàng)檢驗(yàn),血清和組織炎癥細(xì)胞因子測(cè)定,組織切片檢測(cè),組織mRNA表達(dá)檢測(cè),小鼠糞便中微生物mRNA表達(dá)的測(cè)定和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。本發(fā)明LP?KSFY04能夠有效的調(diào)控血栓小鼠的黑尾程度和凝血四項(xiàng),還能夠調(diào)控血清、腎臟和肝臟組織中的炎癥細(xì)胞因子,從而發(fā)揮LP?KSFY04的抑炎作用;進(jìn)一步的檢測(cè)結(jié)果證明LP?KSFY04能夠調(diào)控NF?κB通路的mRNA表達(dá),通過(guò)調(diào)節(jié)避免血栓堵塞。
本發(fā)明授權(quán)小鼠血栓的檢測(cè)方法及植物乳桿菌對(duì)血栓形成的抑制作用在權(quán)利要求書(shū)中公布了:1.一種植物乳桿菌KSFY04對(duì)小鼠血栓形成抑制作用的檢測(cè)方法,其特征在于,檢測(cè)方法具體包括以下步驟:步驟一:材料與試劑,植物乳桿菌KSFY04分離自然發(fā)酵酸牛乳,SPF級(jí)六周齡的雄性昆明小鼠,體重為23±2g;TNF-a、IL-6和IL-1β檢測(cè)試劑盒;TRIzol試劑;SYBRGreenPCRMasterMix;qpCR引物;其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純;步驟二:儀器與設(shè)備,PUN-2048A半自動(dòng)血凝儀,BX43顯微鏡,VarioskanLUX多功能酶標(biāo)儀,StoponePlus定量PCR儀;步驟三:動(dòng)物實(shí)驗(yàn),小鼠飼養(yǎng)在溫度為20±1℃和濕度為30%~40%的環(huán)境下,實(shí)驗(yàn)小鼠可自由采食和飲水,小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后正式開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn);步驟四:凝血四項(xiàng)檢驗(yàn),將收集到的小鼠心臟血采用半自動(dòng)血凝儀測(cè)量活化部分凝血活酶時(shí)間APTT、凝血酶時(shí)間TT、纖維蛋白原FIB和凝血酶原時(shí)間PT;步驟五:血清和組織炎癥細(xì)胞因子測(cè)定,將收集到的小鼠心臟血在1500rpm和4℃下進(jìn)行離心分離10min,去上層血清待用;同時(shí)稱(chēng)取0.1g腎臟和肝臟組織,然后向腎臟和肝臟組織中分別加入0.9mL生理鹽水,然后在4000rpm和4℃下進(jìn)行對(duì)組織進(jìn)行均質(zhì)10min,離心后收集上清液待用;最后按檢測(cè)試劑盒方法測(cè)定血清和組織中的TNF-a、IL-6和IL-1β炎癥細(xì)胞因子水平;步驟六:組織切片檢測(cè),解剖小鼠后,將小鼠的腎臟、肝臟和尾部組織用10%福爾馬林固定;脫水48h后,將組織樣品包埋在石蠟中,進(jìn)行切片,并用蘇木精-伊紅染色;最后用光學(xué)顯微鏡觀察組織的病理變化;步驟七:組織mRNA表達(dá)檢測(cè),分別稱(chēng)取0.1g小鼠尾靜脈組織,在組織中加入0.9mL生理鹽水進(jìn)行勻漿,再加入1.0mL的RNAzol提取小鼠尾靜脈組織中的RNA;然后觀察;步驟八:小鼠糞便中微生物mRNA表達(dá)的測(cè)定,稱(chēng)取1.0g小鼠的糞便,測(cè)定小鼠糞便中微生物的mRNA表達(dá),以檢測(cè)糞便中微生物的組成;步驟九:統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有實(shí)驗(yàn)進(jìn)行三次平行測(cè)定,測(cè)定得到的結(jié)果以平均值表示,并計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)偏差,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差;同時(shí)采用單因素方差分析計(jì)算各組數(shù)據(jù)之間是否具有顯著差異P0.05;在步驟三中,所述的小鼠采取50只昆明小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為正常組、模型組、藥物陽(yáng)性對(duì)照組、LP-KSFY04低濃度處理LP-KSFY04-L組和LP-KSFY04高濃度處理LP-KSFY04-H組;正常組小鼠每天按計(jì)量0.01mLg腹腔注射生理鹽水溶液,其余各組小鼠每日按照0.01mLg計(jì)量腹腔注射0.2%濃度的角叉菜膠溶液,持續(xù)10天;同時(shí),藥物陽(yáng)性對(duì)照組小鼠每日按計(jì)量20mgkg灌胃雙嘧達(dá)莫,LP-KSFY04-L組和LP-KSFY04-H組小鼠每日按108CFUk和109CFUkg的計(jì)量灌胃LP-KSFY04,雙嘧達(dá)莫和LP-KSFY04的灌胃同樣持續(xù)10天;10天后對(duì)小鼠實(shí)施斷頸處死后,記錄各組小鼠尾部黑尾長(zhǎng)度,同時(shí)解剖取小鼠心臟血和內(nèi)臟待測(cè)。
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