恭喜重慶第二師范學院趙欣獲國家專利權
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龍圖騰網(wǎng)恭喜重慶第二師范學院申請的專利小鼠血栓的檢測方法及植物乳桿菌對血栓形成的抑制作用獲國家發(fā)明授權專利權,本發(fā)明授權專利權由國家知識產(chǎn)權局授予,授權公告號為:CN115290872B 。
龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權局官網(wǎng)在2025-03-21發(fā)布的發(fā)明授權授權公告中獲悉:該發(fā)明授權的專利申請?zhí)?專利號為:202210220598.X,技術領域涉及:G01N33/50;該發(fā)明授權小鼠血栓的檢測方法及植物乳桿菌對血栓形成的抑制作用是由趙欣設計研發(fā)完成,并于2022-03-08向國家知識產(chǎn)權局提交的專利申請。
本小鼠血栓的檢測方法及植物乳桿菌對血栓形成的抑制作用在說明書摘要公布了:本發(fā)明提供小鼠血栓的檢測方法及植物乳桿菌對血栓形成的抑制作用,屬于血栓治療領域,該小鼠血栓的檢測方法具體步驟為材料與試劑,儀器與設備,動物實驗,凝血四項檢驗,血清和組織炎癥細胞因子測定,組織切片檢測,組織mRNA表達檢測,小鼠糞便中微生物mRNA表達的測定和統(tǒng)計學分析。本發(fā)明LP?KSFY04能夠有效的調控血栓小鼠的黑尾程度和凝血四項,還能夠調控血清、腎臟和肝臟組織中的炎癥細胞因子,從而發(fā)揮LP?KSFY04的抑炎作用;進一步的檢測結果證明LP?KSFY04能夠調控NF?κB通路的mRNA表達,通過調節(jié)避免血栓堵塞。
本發(fā)明授權小鼠血栓的檢測方法及植物乳桿菌對血栓形成的抑制作用在權利要求書中公布了:1.一種植物乳桿菌KSFY04對小鼠血栓形成抑制作用的檢測方法,其特征在于,檢測方法具體包括以下步驟:步驟一:材料與試劑,植物乳桿菌KSFY04分離自然發(fā)酵酸牛乳,SPF級六周齡的雄性昆明小鼠,體重為23±2g;TNF-a、IL-6和IL-1β檢測試劑盒;TRIzol試劑;SYBRGreenPCRMasterMix;qpCR引物;其余試劑均為國產(chǎn)分析純;步驟二:儀器與設備,PUN-2048A半自動血凝儀,BX43顯微鏡,VarioskanLUX多功能酶標儀,StoponePlus定量PCR儀;步驟三:動物實驗,小鼠飼養(yǎng)在溫度為20±1℃和濕度為30%~40%的環(huán)境下,實驗小鼠可自由采食和飲水,小鼠適應性喂養(yǎng)7d后正式開始進行實驗;步驟四:凝血四項檢驗,將收集到的小鼠心臟血采用半自動血凝儀測量活化部分凝血活酶時間APTT、凝血酶時間TT、纖維蛋白原FIB和凝血酶原時間PT;步驟五:血清和組織炎癥細胞因子測定,將收集到的小鼠心臟血在1500rpm和4℃下進行離心分離10min,去上層血清待用;同時稱取0.1g腎臟和肝臟組織,然后向腎臟和肝臟組織中分別加入0.9mL生理鹽水,然后在4000rpm和4℃下進行對組織進行均質10min,離心后收集上清液待用;最后按檢測試劑盒方法測定血清和組織中的TNF-a、IL-6和IL-1β炎癥細胞因子水平;步驟六:組織切片檢測,解剖小鼠后,將小鼠的腎臟、肝臟和尾部組織用10%福爾馬林固定;脫水48h后,將組織樣品包埋在石蠟中,進行切片,并用蘇木精-伊紅染色;最后用光學顯微鏡觀察組織的病理變化;步驟七:組織mRNA表達檢測,分別稱取0.1g小鼠尾靜脈組織,在組織中加入0.9mL生理鹽水進行勻漿,再加入1.0mL的RNAzol提取小鼠尾靜脈組織中的RNA;然后觀察;步驟八:小鼠糞便中微生物mRNA表達的測定,稱取1.0g小鼠的糞便,測定小鼠糞便中微生物的mRNA表達,以檢測糞便中微生物的組成;步驟九:統(tǒng)計學分析,所有實驗進行三次平行測定,測定得到的結果以平均值表示,并計算出標準偏差,實驗結果表示為平均值±標準偏差;同時采用單因素方差分析計算各組數(shù)據(jù)之間是否具有顯著差異P0.05;在步驟三中,所述的小鼠采取50只昆明小鼠隨機分為5組,每組10只,分別為正常組、模型組、藥物陽性對照組、LP-KSFY04低濃度處理LP-KSFY04-L組和LP-KSFY04高濃度處理LP-KSFY04-H組;正常組小鼠每天按計量0.01mLg腹腔注射生理鹽水溶液,其余各組小鼠每日按照0.01mLg計量腹腔注射0.2%濃度的角叉菜膠溶液,持續(xù)10天;同時,藥物陽性對照組小鼠每日按計量20mgkg灌胃雙嘧達莫,LP-KSFY04-L組和LP-KSFY04-H組小鼠每日按108CFUk和109CFUkg的計量灌胃LP-KSFY04,雙嘧達莫和LP-KSFY04的灌胃同樣持續(xù)10天;10天后對小鼠實施斷頸處死后,記錄各組小鼠尾部黑尾長度,同時解剖取小鼠心臟血和內臟待測。
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