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龍圖騰網恭喜中國醫學科學院輸血研究所申請的專利基于三代測序的RHD、RHCE mRNA全長的測定方法及試劑盒獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN115851895B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-21發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202211659889.5，技術領域涉及：C12Q1/6869；該發明授權基于三代測序的RHD、RHCE mRNA全長的測定方法及試劑盒是由劉忠;王玨;官笑羽;紀欣設計研發完成，并于2022-12-23向國家知識產權局提交的專利申請。

本基于三代測序的RHD、RHCE mRNA全長的測定方法及試劑盒在說明書摘要公布了：本發明公開了基于三代測序的RHD、RHCEmRNA全長的測定方法及試劑盒，屬于生物技術領域，解決現有技術不能測定RHD、RHCEmRNA全長，不能檢測低水平剪切體、不能對轉錄本相對定量的問題。本發明測定方法包括：mRNA的抽提及cDNA逆轉錄；PCR擴增；三代測序文庫構建及上機測序；測序數據過濾與質控；轉錄本的表達量分析。本發明的試劑盒包括有同時擴增RHD、RHCE轉錄本全長的引物。本發明成功利用長鏈單分子測序技術對RHD、RHCE基因進行全長轉錄本測序，檢測出RhD陽性和Del型樣本中RHD、RHCE基因的多種轉錄本，并可對不同轉錄本的表達水平進行相對定量，為揭示RH血型變異的分子機制提供了新方法。本發明的同步檢測方法可以一步得到兩個基因的結果，簡化了實驗流程，豐富檢測結果。

本發明授權基于三代測序的RHD、RHCE mRNA全長的測定方法及試劑盒在權利要求書中公布了：1.一種基于三代測序的RHD、RHCEmRNA全長的測定方法，其特征在于，所述測定方法用于測定RHD、RHCEmRNA的全長及轉錄本的表達量分析，所述測定方法包括以下步驟：S1.mRNA的抽提及cDNA逆轉錄：提供不同樣本的mRNA，再逆轉錄成cDNA；S2.PCR擴增：設計能同時擴增RHD、RHCEmRNA全長的擴增引物，采用該引物對步驟S1所得的cDNA進行擴增；所述引物的核苷酸序列為：上游：5’-GCACAGAGACGGACACAGGATG-3’；下游：5’-GCAGGCAACAGTGAGAGGAAGT-3’；S3.三代測序文庫構建及上機測序：將步驟S2所得的PCR產物純化、定量、末端修復、連接標簽、添加測序接頭后再次純化，完成文庫的構建；將上述cDNA測序文庫經三代測序平臺測序；S4.測序數據過濾與質控：對測序所得的短片段和低質量數據進行剪切與過濾，以及去除50bp接頭序列得到有效數據，過濾條件為200bp＜所測序列長度＜3000bp，測序質量Qscore＞7；最后再對過濾后的有效數據進行質控，得到RHD、RHCEmRNA全長信息；所述測定方法還包括轉錄本的表達量分析，步驟具體為：S5.根據所測轉錄本與Ensembl數據庫人類參考基因組GRCh38（hg38）gtf文件進行比對；采用每千個堿基的轉錄和每百萬映射讀取的轉錄本數TPM作為衡量轉錄本或基因表達水平的指標，TPM計算公式如下：TPMi=NiLi?1000000sumNiLi+……+NmLmTPMi：基因i的TPM；Ni：基因i上的read數；Li：基因i的外顯子長度總和；sumNiLi+……+NmLm為所有m個外顯子按長度進行標準化之后數值的和；定量每個樣本各轉錄本的TPM和NumReads。

如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術，可聯系本專利的申請人或專利權人中國醫學科學院輸血研究所，其通訊地址為：610052 四川省成都市成華區華彩路26號；或者聯系龍圖騰網官方客服，聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。