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龍圖騰網(wǎng)恭喜重慶醫(yī)科大學(xué)申請的專利一種基于PdIrBP介孔納米球與科琴黑的循環(huán)腫瘤細(xì)胞生物傳感器獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN113008971B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-06-03發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：201911321158.8，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N27/48；該發(fā)明授權(quán)一種基于PdIrBP介孔納米球與科琴黑的循環(huán)腫瘤細(xì)胞生物傳感器是由馮文莉;謝國明;彭?xiàng)钤O(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2019-12-19向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種基于PdIrBP介孔納米球與科琴黑的循環(huán)腫瘤細(xì)胞生物傳感器在說明書摘要公布了：循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測和回收對監(jiān)測轉(zhuǎn)移和治療效果具有重要的臨床意義。在這項(xiàng)工作中，我們開發(fā)了一種基于納米材料的集成電化學(xué)傳感模型，以實(shí)現(xiàn)對循環(huán)腫瘤細(xì)胞的高靈敏檢測和無損收集。首次將科琴黑與金納米顆粒結(jié)合在一起，并用于修飾金電極的表面，從而提高了電導(dǎo)率并增加了電極的比表面積。PdIrBP介孔納米球和抗體結(jié)合在一起形成信號探針，用作探測標(biāo)簽以放大電流信號。此外，將甘氨酸鹽酸用作抗體洗脫液，可從電極釋放并收集捕獲的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，以用于進(jìn)一步的臨床研究。在10mL到1×106mL范圍內(nèi)獲得的電化學(xué)信號和靶細(xì)胞濃度之間有良好的線性關(guān)系，檢出限低至2mL。因此，這種新型的細(xì)胞傳感器模型具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，可用于癌癥患者的早期診斷和預(yù)后監(jiān)測。

本發(fā)明授權(quán)一種基于PdIrBP介孔納米球與科琴黑的循環(huán)腫瘤細(xì)胞生物傳感器在權(quán)利要求書中公布了：1.一種基于PdIrBP介孔納米球與科琴黑的循環(huán)腫瘤細(xì)胞生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1科琴黑的準(zhǔn)備借助于超聲攪拌將2.0mg的科琴黑分散在4.0mL的0.5wt.％的殼聚糖溶液中以獲得均勻的懸浮液；2金納米顆粒的制備將100mL的0.01％氯金酸水溶液煮沸10-15分鐘，然后在劇烈攪拌和連續(xù)加熱的情況下逐滴加入1mL的2.0wt.％檸檬酸鈉溶液，然后將上述混合溶液連續(xù)攪拌直至顏色從黃色變?yōu)樯罘奂t色，加熱停止；待冷卻至室溫后，以11000rmin的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，用去離子水洗滌收集金納米顆粒，并在4℃下保存；3PdIrBP介孔納米球的合成將30mg雙十八烷基二甲基氯化銨添加到10.0mL去離子水中，并攪拌以獲得均勻的溶液；隨后，將1.0mL的0.337molL氟化銨，1.0mL的0.101molL硼酸添加到之前的溶液中，然后添加金屬前體0.8mL的10mmolL氯鈀酸和0.8mL的10mmolL氯銥酸；溫育5分鐘后，注入0.8mL的氨水10wt.％以調(diào)節(jié)溶液的pH；當(dāng)混合溶液的顏色從棕黃色變?yōu)闊o色后，將1.0mL的0.034molL次磷酸二氫鈉混合到上述溶液中，并在95℃下磁力攪拌20分鐘；最后，注入1.0mL新鮮制備的0.1molL二甲胺硼烷以引發(fā)還原反應(yīng)，溶液的顏色逐漸演變?yōu)樯钭厣辉?5℃下反應(yīng)30分鐘后，通過以8000rmin離心5分鐘收集產(chǎn)物，并用乙醇和去離子水洗滌幾次；4信號探針的制備將0.5mg聚乙二醇添加到1.0mL的PdIrBP介孔納米球1.0mgmL中，將混合物在室溫下攪拌孵育3小時(shí)，然后用去離子水離心洗滌3次，最后將沉淀物分散在500μL去離子水中以備將來使用；抗體和經(jīng)聚乙二醇修飾的PdIrBP納米球通過使用1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺作為偶聯(lián)劑連接；將50μL上述制備的修飾過的PdIrBP介孔納米球在室溫下添加至450μL的10mmolLPBS中，并充分?jǐn)嚢瑁浑S后加入1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亞胺5μL，25mM水溶液和N-羥基琥珀酰亞胺5μL，50mM水溶液，20分鐘后，將納米材料用去離子水洗滌兩次，然后重新分散在50μL的PBS中；隨后，將50μL抗體20mgmL添加到納米球懸液中，在室溫下孵育1小時(shí)后，將反應(yīng)溶液儲存在4℃的冰箱中以備將來使用；5生物傳感器的構(gòu)建將金電極直徑3mm用0.3μm和0.05μm的氧化鋁拋光至鏡面狀，隨后分別在雙蒸水，乙醇和雙蒸水中交替超聲處理10分鐘；在室溫下干燥后，將電極在新鮮制備的食人魚液98％硫酸：30％過氧化氫，體積比為3：1中活化5分鐘，并用超純水徹底沖洗，在空氣中干燥；將10μL步驟1準(zhǔn)備好的科琴黑溶液加到電極上，并在37℃下進(jìn)行干燥，用同樣的方法將步驟2富集的金納米顆粒滴加在已修飾了科琴黑的電極上；再將10μL抗體混合物80μgmL滴加在修飾電極上，在37℃下加蓋放置1h；用0.01molL的PBS緩沖液沖洗后，再加入10μL的0.3％BSA在37℃孵育1h，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)；所得的電極用PBS洗滌，并保存在4℃?zhèn)溆茫?循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及釋放將10μL循環(huán)腫瘤細(xì)胞加到步驟5制備好的電極上，在37℃溫育40分鐘。然后將10μL步驟4合成的信號探針滴到電極上進(jìn)行免疫反應(yīng)，形成雙抗夾心免疫復(fù)合物；用PBS洗凈未結(jié)合在電極上的物質(zhì)，檢測出電極的DPV信號；在細(xì)胞檢測完成后，將電極浸入1mL甘氨酸-鹽酸洗脫液0.1molL中10s，然后快速加入幾滴0.4molL的NaOH溶液以調(diào)節(jié)pH值；在500rmin下離心5分鐘后，將所得沉淀物用PBS0.01molL洗滌2-3次獲得循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

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