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龍圖騰網(wǎng)恭喜溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院(溫州醫(yī)科大學附屬育英兒童醫(yī)院)申請的專利用于模擬十二指腸梗阻的斑馬魚模型的建立方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN119837089B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-30發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202510325604.1，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/89；該發(fā)明授權(quán)用于模擬十二指腸梗阻的斑馬魚模型的建立方法是由黃秀峰;夏雨寒;伍逸清;林振浪設計研發(fā)完成，并于2025-03-19向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本用于模擬十二指腸梗阻的斑馬魚模型的建立方法在說明書摘要公布了：新生兒先天性十二指腸梗阻是一種由于胎兒期十二指腸發(fā)育異常導致的腸腔阻塞性疾病，是新生兒消化道梗阻中較常見的一種類型。其全球發(fā)病率約為15000至110000新生兒，在亞洲人群中更為常見。該病的典型臨床表現(xiàn)包括出生后即出現(xiàn)嘔吐、上腹部膨隆以及胎便排出延遲，本發(fā)明提供了一種用于模擬十二指腸梗阻的斑馬魚模型的建立方法，并且額外的提供了靶點的設計思路。

本發(fā)明授權(quán)用于模擬十二指腸梗阻的斑馬魚模型的建立方法在權(quán)利要求書中公布了：1.用于模擬十二指腸梗阻的斑馬魚模型的建立方法，其特征在于，包括下列步驟：S1、將gRNA靶點序列設計在斑馬魚snapc4基因的氨基酸結(jié)構(gòu)域上，sgRNA具體序列為GAGATCGAGGTCCAGCTCTCTGG、AACTCTATCTTCTCAGTACCTGG、CTAGGGTCCTCCAGCTAATGAGG、GATAAAATCGCAGAGGCTCTTGG中的任意其一，合成引物；S2、以pMD19-gata5_gRNAscaffold載體為模板，使用步驟S1中的引物制備gRNA體外轉(zhuǎn)錄模板；S3、將步驟S2的gRNA體外轉(zhuǎn)錄模板進行體外轉(zhuǎn)錄、純化回收獲得gRNA；S4、將步驟S3回收獲得gRNA和Cas9mRNA新鮮混合,使gRNA終濃度達到320ngμL,Cas9mRNA達到800ngμL后顯微注射入單細胞期斑馬魚胚胎，每個靶點注射180～220枚；S5、收集步驟S4注射入單細胞期斑馬魚胚胎完成72小時后的斑馬魚胚胎，提取基因組，PCR擴增目標片段，測序，測序結(jié)果為雙峰的注射批次胚胎進入飼養(yǎng)系統(tǒng)，飼養(yǎng)待性成熟時通過篩選其下一代胚胎檢測有效突變類型斑馬魚，從而獲得snapc4突變斑馬魚。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)＠麢?quán)人溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院(溫州醫(yī)科大學附屬育英兒童醫(yī)院)，其通訊地址為：325000 浙江省溫州市鹿城區(qū)蒲鞋市街道學院西路109號；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。