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龍圖騰網恭喜中國海洋大學申請的專利一種侏儒蛤卵子的電穿孔方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN114752624B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-15發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202210380326.6，技術領域涉及：C12N15/85；該發明授權一種侏儒蛤卵子的電穿孔方法是由秦貞奎;林思宇;張志峰;郭曉琳;李茜茜設計研發完成，并于2022-04-08向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種侏儒蛤卵子的電穿孔方法在說明書摘要公布了：本發明公開了一種侏儒蛤卵子的電穿孔方法，電穿孔方法的具體步驟如下：S1：篩選并構建熒光表達載體；S2：將載體和卵子混和，同時對電穿孔條件中的電壓，脈沖時間，脈沖次數等幾個參數進行選取和組合；本發明可篩選出含有高轉錄活性侏儒蛤基因啟動子的熒光表達載體，首次開展侏儒蛤卵子電穿孔轉染技術的研究，在150V，1ms，電穿孔1次的條件下，孵化率大于98％，畸形率小于10％，熒光效率可達33.66±2.71％；在25V，10ms，電穿孔4次條件下，孵化率大于70％，畸形率為13％，熒光率為24.57±2.35％，該電穿孔效率在海洋雙殼貝類卵子的電穿孔研究中效率高，為研究貝類基因功能提供了非常好的工具，具有極高的應用價值。

本發明授權一種侏儒蛤卵子的電穿孔方法在權利要求書中公布了：1.一種侏儒蛤卵子的電穿孔方法，其特征在于，所述電穿孔方法的具體步驟如下：S1：篩選并構建不同“ef1α啟動子-tdtomato”熒光表達載體，并篩選高表達活性的熒光載體；S2：將載體和卵子混和，同時對電穿孔條件中的電壓，脈沖時間，脈沖次數參數進行選取和組合，通過電穿孔儀將熒光表達載體轉入侏儒蛤的卵子，于受精后48h根據胚胎熒光效率篩選最佳電轉條件；所述步驟S1中，構建熒光載體的具體方法如下：根據侏儒蛤轉錄組數據，確定從受精卵及D型幼蟲階段ef1α基因均有較高的表達量；在基因組中獲取ef1α基因的全長序列，使用FPROM、BDGP預測啟動子位置，并根據預測結果將啟動子序列分為三段，使用PrimerPremier5設計引物，以侏儒蛤DNA為模板，擴增其ef1α啟動子序列并構建含有目的靶序列及報告基因的載體；步驟S1中，使用HEK293T細胞轉染篩選高表達活性的熒光載體，最終篩選獲得ef1α啟動子-2425-tdtomato熒光載體；所述ef1α啟動子以侏儒蛤基因組DNA為模板，使用CCCTCGAGGATTGATGTGTCATTGATAAG、CCAAGCTTTGTGCTGAGACAGGTTGAGGTA引物對，擴增獲得；步驟S2中，侏儒蛤卵子的提取方法如下：取性腺發育良好的雌性、雄性成熟侏儒蛤，干燥避光處陰干流水刺激侏儒蛤排放配子，借助顯微鏡觀察精卵形態和活力，500目篩絹富集侏儒蛤的形態圓潤、卵黃均勻飽滿的卵子，并收集足量的游動能力良好的精子；步驟S2中，所述電穿孔條件為150V，1ms，電穿孔1次，或25V，10ms，電穿孔4次，脈沖間隔為1s，電穿孔后靜置10min，加入過濾海水及精子受精，放在22℃培養箱中培養。

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