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龍圖騰網恭喜北京百力格生物科技有限公司申請的專利非靶標依賴的檢測靶基因中SNP位點基因型的方法及其試劑盒獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN119842874B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-06-13發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202510347438.5，技術領域涉及：C12Q1/6858；該發明授權非靶標依賴的檢測靶基因中SNP位點基因型的方法及其試劑盒是由佟宗軒;李俊;莫瑞瑞設計研發完成，并于2025-03-24向國家知識產權局提交的專利申請。

本非靶標依賴的檢測靶基因中SNP位點基因型的方法及其試劑盒在說明書摘要公布了：本發明提供非靶標依賴的檢測靶基因中SNP位點基因型的方法及其試劑盒，所述方法包括針對含有待測SNP位點的靶基因設計第一引物、第二引物和媒介探針，根據所述媒介探針的媒介序列設計檢測探針，在含有所述第一引物、第二引物、媒介探針、檢測探針、含有所述靶基因的核酸樣品和DNA聚合酶反應體系中，進行PCR擴增和擴增產物的分析。本發明的方法是一種非靶標依賴的檢測方法，通過在熔解曲線分析中檢測具有某一種雙鏈體的熔點的熔解峰，可判斷與該雙鏈體對應的靶基因SNP分型，本發明可以任意構建雙鏈體的Tm值，實現了SNP位點熔解曲線峰自定義，從而解決了區分同一SNP位點的基因型野生型和突變型Tm值區分不開的問題，降低了設計難度。

本發明授權非靶標依賴的檢測靶基因中SNP位點基因型的方法及其試劑盒在權利要求書中公布了：1.非診斷目的的非靶標依賴的檢測靶基因中SNP位點基因型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 步驟1：針對含有待測SNP位點的靶基因設計第一引物、第二引物和媒介探針， 1.1.所述第一引物和第二引物與所述靶基因特異性結合，用于擴增含有所述待測SNP位點的靶基因； 1.2.所述媒介探針從5’端至3’端方向依次包含媒介序列和靶基因特異性結合序列，其中所述媒介序列不能與靶基因結合；所述靶基因特異性結合序列與所述靶基因能夠特異性互補結合，且沿著5’端至3’端方向，靶基因特異性結合序列的第一個堿基序列對應于所述靶基因的SNP位點，所述第一個堿基序列與所述靶基因的SNP位點的野生型堿基或突變型堿基互補；媒介探針的3’端標記有阻止延伸的基團； 步驟2：根據所述媒介探針的媒介序列設計檢測探針，所述檢測探針依次包含有與所述媒介探針的媒介序列的互補序列、所述媒介探針的靶基因特異性結合序列沿5’端至3’端方向的第一個堿基互補的堿基和延伸序列，所述延伸序列，沿3’端至5’端方向，第一個堿基不能與所述媒介探針的靶基因特異性結合序列沿5’端至3’端方向第二個堿基互補； 步驟3：在含有所述第一引物、第二引物、媒介探針、檢測探針、含有所述靶基因的核酸樣品和DNA聚合酶反應體系中，進行PCR擴增和擴增產物的分析： 3.1.當所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基是與所述靶基因SNP位點的野生型堿基互補時： 3.1.1.若所述靶基因SNP位點為野生型時，此時，所述媒介探針中所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基與野生型靶基因互補結合形成SNP位點堿基對，所述第一引物和第二引物均進行延伸擴增，沿5’端至3’端延伸至所述媒介探針中媒介序列的最后一個堿基時，DNA聚合酶將切割所述SNP位點堿基對與其相鄰第一個堿基對之間的磷酸二酯鍵，切割下來的序列片段包含媒介序列及所述第一個堿基，將該片段稱為第一媒介引物，所述第一媒介引物與檢測探針完整互補配對，并沿著檢測探針的延伸序列部分延伸形成第一雙鏈產物，當只檢測到所述第一雙鏈產物形成時，即可判定含有所述靶基因的核酸樣品中所述SNP位點為野生型； 3.1.2.若所述靶基因SNP位點為突變型時，此時，所述媒介探針中所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基與突變型靶基因不互補結合，此時，所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基與所述媒介序列均不與靶基因互補結合，所述第一引物和第二引物均進行延伸擴增，沿5’端至3’端延伸至所述媒介探針中所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基時，DNA聚合酶將切割所述靶基因特異性結合序列中與靶基因配對結合的第一個堿基和第二個堿基之間的磷酸二酯鍵，切割下來的序列片段包含媒介序列、所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基以及與靶基因配對結合的第一個堿基，將該片段稱為第二媒介引物；所述第二媒介引物不能沿著檢測探針延伸，因此得到第二雙鏈產物，當只檢測到所述第二雙鏈產物形成時，即可判定含有所述靶基因的核酸樣品中所述SNP位點為突變型； 3.1.3.若所述靶基因SNP位點為雜合型時，此時將同時生成所述第一雙鏈產物和所述第二雙鏈產物，因此，當檢測到所述第一雙鏈產物和所述第二雙鏈產物同時形成時，即可判定含有所述靶基因的核酸樣品中所述SNP位點為雜合型； 3.2.當所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基序列為與所述靶基因SNP位點的錯義突變型堿基互補時： 3.2.1.若所述靶基因SNP位點為野生型或同義突變型時，此時，所述媒介探針中所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基與所述靶基因不互補結合，此時，所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基與所述媒介序列均不與靶基因互補結合，如同上述3.1.2中一樣，只檢測到所述第二雙鏈產物形成，即可判定含有所述靶基因的核酸樣品中所述SNP位點為野生型或同義突變型； 3.2.2.若所述靶基因SNP位點為錯義突變型時，此時，所述媒介探針中所述靶基因特異性結合序列的第一個堿基與錯義突變型靶基因互補結合形成SNP位點堿基對，如同上述3.1.1中一樣，只檢測到所述第一雙鏈產物形成，即可判定含有所述靶基因的核酸樣品中所述SNP位點為錯義突變型； 3.2.3.如同上述3.1.3中一樣，當檢測到所述第一雙鏈產物和所述第二雙鏈產物同時形成時，即可判定含有所述靶基因的核酸樣品中所述SNP位點為雜合型。

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