恭喜山東第一醫科大學(山東省醫學科學院)王昕宇獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜山東第一醫科大學(山東省醫學科學院)申請的專利一種唾液斑DNA、RNA和蛋白質同時提取的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115287283B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-05-23發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211131689.2,技術領域涉及:C12N15/10;該發明授權一種唾液斑DNA、RNA和蛋白質同時提取的方法是由王昕宇;嚴江偉;方晨;周鵬;李敏;許曉群;王盈;郭藝琳;孟德萍;于春江;熊若彤;王嘉慧設計研發完成,并于2022-09-16向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種唾液斑DNA、RNA和蛋白質同時提取的方法在說明書摘要公布了:本發明提供了一種唾液斑DNA、RNA和蛋白質同時提取的方法,屬于生物技術領域。本發明所述方法的步驟包括:1將唾液斑放于含有裂解緩沖液的反應體系中,得到裂解產物;2離心裂解產物,收集裂解上清液,依次流經DNA吸附柱、RNA吸附柱,收集吸附有DNA的吸附柱和吸附RNA的吸附柱以及最后流RNA吸附柱的過柱液體;3將所述含有DNA的吸附柱,所述含有RNA的吸附柱和第一次過RNA吸附柱的濾液分別純化,得到DNA溶液、RNA溶液和蛋白質溶液。經檢測結果顯示,對獲得的DNA、RNA和蛋白質樣本進行STR分型、熒光定量PCR、ELISA唾液淀粉酶均可檢測出相應濃度的樣本,且最少唾液用量為10μL。
本發明授權一種唾液斑DNA、RNA和蛋白質同時提取的方法在權利要求書中公布了:1.一種唾液斑DNA、RNA和蛋白質同時提取的方法,其特征在于,包括如下步驟:1將唾液斑與裂解液混合,震蕩得裂解物;2將裂解物13000rpm離心10~20min,取裂解物上清液,加入DNA吸附柱,離心DNA吸附柱,收集去除DNA的上清液;將離心后的DNA吸附柱進行DNA純化處理,得DNA溶液;3將所述去除DNA的上清液與無水乙醇混合,然后加入RNA吸附柱,離心RNA吸附柱,收集去除RNA的上清液;將離心后的RNA吸附柱進行RNA純化處理,得RNA溶液;4將所述去除RNA的上清液與緩沖液APP混合離心,去除上清液后加入乙醇離心,得蛋白質沉淀,將蛋白質沉淀溶解于PBS中,即得蛋白質溶液;步驟1所述唾液斑需剪碎至≤0.5cm2;步驟2所述離心DNA吸附柱的條件為10000~15000rpm離心20~40s;所述DNA純化處理包括如下步驟:向步驟2所述離心后的DNA吸附柱中加入抑制物去除液IR,離心棄上清液,加入漂洗液WB,離心棄上清液;取離心后的DNA吸附柱,加入20~80μL洗脫緩沖液EB,離心收集含DNA的上清液,保留DNA吸附柱;將含DNA的上清液重新加入保留的DNA吸附柱中,離心,即得DNA溶液;步驟3所述無水乙醇的加入量為去除DNA的上清液的1~1.5倍;所述RNA純化處理包括如下步驟:將步驟3所述離心后的RNA吸附柱用漂洗液清洗,離心得漂洗后的RNA吸附柱,加入5~15μLRNasefreewater,室溫放置后離心,保留RNA吸附柱,得含RNA的上清液;將含RNA的上清液重新加入保留的RNA吸附柱中,室溫放置后離心,即得RNA溶液;在加入RNasefreewater前,先將漂洗離心后的RNA吸附柱晾干處理;所述含RNA的上清液重新加入量為8~12μL;步驟4所述乙醇為60~80%的乙醇水溶液,所述乙醇的加入量為0.3~0.7mL;步驟4所述PBS溶液的加入量為80~120μL。
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