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龍圖騰網恭喜上海鹿明生物科技有限公司申請的專利一種人/動物體液中類固醇激素的定量檢測方法和應用獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN115963199B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-29發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202211647529.3，技術領域涉及：G01N30/02；該發明授權一種人/動物體液中類固醇激素的定量檢測方法和應用是由李俊鵬;尹娜娜;沈珈西;胡哲;彭章曉;付艷蕾;舒烈波設計研發完成，并于2022-12-21向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種人/動物體液中類固醇激素的定量檢測方法和應用在說明書摘要公布了：本發明公開了一種人動物血漿、血清、尿液等體液中24種類固醇激素的定量檢測方法，所述方法基于超高效液相色譜串聯質譜法結合在線酶解?固相萃取，可實現一次性檢測24種類固醇激素游離態和結合態的總量，方法的檢出限可達pgmL，方法學驗證結果滿足9101?分析方法驗證指導原則。本發明提供的檢測方法能夠同時準確定量檢測人動物血漿、血清、尿液等體液中24種類固醇激素，靈敏度高，特異性強，所需樣本量少，檢測時間短，提高了方法的靈敏度、精密度、檢測效率和檢測通量，成本低廉，避免了資源浪費，為臨床診斷、監測和科學研究等提供高效、強大的輔助。

本發明授權一種人/動物體液中類固醇激素的定量檢測方法和應用在權利要求書中公布了：1.一種人或動物體液中類固醇激素的定量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1，制備基質混合標準工作溶液：將多種類固醇激素標準品分別加入第一溶劑超聲溶解獲得類固醇激素單標標準儲備液，將多種類固醇激素的單標標準儲備液同時加入甲醇與水的混合溶液超聲溶解獲得類固醇激素混合標準儲備液，再取類固醇激素混合標準儲備液加入第二溶劑超聲溶解，獲得不同濃度的混合標準溶液，最后使用質量分數為1%的BSA溶液將各濃度混合標準溶液進行稀釋，得到不同濃度的基質混合標準工作溶液；步驟2，目標物提取：待測樣本及不同濃度的基質混合標準工作溶液采用有機試劑蛋白沉淀法通過提取劑1、提取劑2提取分別獲取上清液和蛋白沉淀；步驟3，在線酶解-固相萃取：固相萃取柱用200μL甲醇活化，再用200μL水平衡，將硫酸酯酶和β-葡萄糖醛酸酶的混合溶液加載至固相萃取柱，棄去流出液，使硫酸酯酶和β-葡萄糖醛酸酶鍵合在固相萃取柱的填料上，將步驟2中獲取的上清液二次加載至固相萃取柱上，關閉流出閥，將其置于37℃環境下在線酶解60分鐘，緩慢打開流出閥，棄去流出液，分別使用淋洗劑1、淋洗劑2淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，最后使用洗脫劑1將固相萃取柱上目標物洗脫并收集至置于玻璃進樣小瓶的玻璃內襯管中，補加水至流動相初始比例并混勻，得到待測上機樣本和標準測試品；步驟4，儀器分析：采用超高效液相色譜質譜聯用法測定步驟3中的待測上機樣本和標準測試品，根據保留時間和母-子離子對信息指認目標分析物，再根據目標分析物的選擇離子對色譜峰面積通過內標標準曲線法進行定量，確定待測樣品中各種類固醇激素的含量；所述液相色譜質譜聯用法為超高液相色譜串聯質譜聯用法；所述超高液相色譜的測定條件為：色譜柱：C8液相色譜柱；柱溫：45℃；進樣量：5~20μL；流速：0.3mLmin；流動相A相為0.5mM氟化銨水溶液；流動相B相為甲醇；分析時間為13min；梯度洗脫；所述質譜的測定條件為：電離方式：電噴霧離子源；離子源溫度為500℃；氣簾氣為40psi；碰撞誘導電離參數為medium；離子噴霧電壓：負離子模式設定的電壓為-4500V，正離子模式設定的電壓為5500V；離子源Gas1:60psi；Gas2:55psi；監測方式為多反應監測MRM模式進行一、二級質譜分析；所述類固醇激素為：孕烯醇酮、17α-羥基孕烯醇酮、孕酮、17α-羥基孕酮、皮質酮、11-脫氧皮質醇、21-脫氧皮質醇、11-脫氧皮質酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、二氫睪酮、脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、睪酮、可的松、褪黑素、醛固酮、雄烯二酮、皮質醇、雄烯二醇、雄酮、表睪酮和20-羥基蛻皮酮。

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