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龍圖騰網恭喜北賽泓升(北京)生物科技有限公司申請的專利人多能干細胞分化來源的軟骨微組織的制備方法及用途獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN118109397B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-21發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202211522543.0，技術領域涉及：C12N5/077；該發明授權人多能干細胞分化來源的軟骨微組織的制備方法及用途是由請求不公布姓名;請求不公布姓名;請求不公布姓名;請求不公布姓名設計研發完成，并于2022-11-30向國家知識產權局提交的專利申請。

本人多能干細胞分化來源的軟骨微組織的制備方法及用途在說明書摘要公布了：提供了制備人多能性干細胞分化來源的軟骨微組織的制備方法及用途。本文所述的軟骨細胞微組織包含人多能性干細胞分化來源的軟骨細胞和其分泌的細胞外基質蛋白，并且與成體原代軟骨細胞相比具有更高的細胞外基質蛋白COL2A1、ACAN、COL9A1、SPARC、COL11A1和SOX9表達量和相似的HAPLN1表達量，并且降低的MFAP5表達。本文所述的軟骨細胞微組織比目前市場上自體軟骨細胞產品具有更高的軟骨細胞外基質相關基因COL2A1、ACAN、SOX9、COL9A1、COL11A1、SPARC和透明軟骨細胞標志物基因HAPLN1表達量，以及更低的纖維軟骨細胞標志物基因MFAP5表達量。

本發明授權人多能干細胞分化來源的軟骨微組織的制備方法及用途在權利要求書中公布了：1.制備軟骨細胞微組織的方法，其包括：A1將iPS細胞分化為軟骨前體細胞，其中軟骨前體細胞對于CD73、CD90、CD105和CD44呈陽性，并且對于CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45和HLADR呈陰性；B1在軟骨前體細胞培養基中以3D細胞培養方式靜置培養軟骨前體細胞，以聚集形成單獨的球體或類球體，其中軟骨前體細胞培養基由DMEM高糖培養基、1%-10%Knockout血清替代品、10-40ngmlEGF和10-40ngmlFGF2組成；C1將軟骨前體細胞培養基更換為軟骨細胞微組織培養基并且靜置培養單獨的球體或類球體1-28天，其中軟骨細胞微組織培養基由DMEM高糖培養基、0.5%-10%Knockout血清替代品、0.5%-10%的胰島素-轉鐵蛋白-硒添加劑、0.5-10mM丙酮酸鈉、50-200UmL青霉素、50-200μgmL鏈霉素、0.05-1mM抗壞血酸鈉、0.05-1uM地塞米松、10-100μgmL脯氨酸、10-100ngmLTGF-β3和10-100ngmLBMP2組成；以及D1在軟骨細胞微組織培養基中搖動培養懸浮的單獨的球體或類球體，直至獲得軟骨細胞微組織；其中步驟A1包括：1在誘導iPS細胞分化的培養基中培養iPS細胞20-28小時，該培養基包含DMEMF12培養基并且包含0.5-5%青霉素、0.5-5%鏈霉素、0.5-5%ITS-A、1-10%B27、0.5-5%NEAA和50-200μMβ-巰基乙醇；2在10-50ngmLWNT3a和50-100ngmLActivinA的存在下誘導20-28小時；3在10-50ngmLWNT3a、10-50ngmLActivinA和10-50ngmLFGF2的存在下誘導20-28小時；4在10-50ngmLWNT3a、5-50ngmLActivinA、10-50ngmLFGF2及20-80ngmLBMP4的存在下誘導20-28小時；5在10-50ngmLFGF2、20-80ngmLBMP4、1-10ngmLNT4及100ngmLFollistatin的存在下將細胞進行傳代，并且培養3-5天；6在10-50ngmLFGF2、20-80ngmLBMP4及1-10ngmLNT4的存在下誘導20-28小時；7在10-50ngmLFGF2、10-50ngmLBMP4、10-50ngmLGDF5、1-10ngmLNT4及5-50ngmLTGFβ3的存在下將細胞進行傳代，并且培養1-3天；和8在10-50ngmLFGF2、20-80ngmLGDF5、1-10ngmLNT4及5-50ngmLTGFβ3的存在下將細胞培養3-6天；然后將細胞傳代15代以上，得到軟骨前體細胞。

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