恭喜中國農業科學院植物保護研究所李方方獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜中國農業科學院植物保護研究所申請的專利基于CRISPR/LbCas12a系統抑制雙生病毒侵染載體及構建方法和應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119193691B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-05-20發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411628526.4,技術領域涉及:C12N15/84;該發明授權基于CRISPR/LbCas12a系統抑制雙生病毒侵染載體及構建方法和應用是由李方方;周雪平;徐子妍;李浩設計研發完成,并于2024-11-14向國家知識產權局提交的專利申請。
本基于CRISPR/LbCas12a系統抑制雙生病毒侵染載體及構建方法和應用在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于CRISPRLbCas12a系統抑制雙生病毒侵染載體及構建方法和應用,所述雙生病毒為TYLCCNV與其伴隨的衛星病毒TYLCCNB;包括針對TYLCCNV的復制關鍵位點構建的pCambia1300:LbCas12?fgY10A及pCambia1300:T5exo?LbCas12?fgY10A載體、針對TYLCCNB的復制關鍵位點構建的pCambia1300:LbCas12?fgY10b及pCambia1300:T5exo?LbCas12?fgY10b載體、針對TYLCCNVTYLCCNB復制關鍵位點構建的pCambia1300:T5exo?LbCas12?Y10*4載體中的至少一種。本發明針對雙生病毒的復制關鍵位點設計crRNA,比目前常用的CRISPRCas9系統具有更好的抗病活性。
本發明授權基于CRISPR/LbCas12a系統抑制雙生病毒侵染載體及構建方法和應用在權利要求書中公布了:1.一種基于CRISPRLbCas12a系統抑制雙生病毒侵染載體,其特征在于:所述雙生病毒為TYLCCNVTYLCCNB;包括針對TYLCCNV的復制關鍵位點構建的pCambia1300:LbCas12-fgY10A及pCambia1300:T5exo-LbCas12-fgY10A載體、針對TYLCCNB的復制關鍵位點構建的pCambia1300:LbCas12-fgY10b及pCambia1300:T5exo-LbCas12-fgY10b載體、針對TYLCCNVTYLCCNB復制關鍵位點構建的pCambia1300:T5exo-LbCas12-Y10*4載體中的至少一種;在TYLCCNV復制關鍵位點附近選定PAM位點并設計兩條crRNA,構建含該位點的pCambia1300:LbCas12-fgY10A載體所需的2條crRNA鏈:fgY10A-F1R1,其序列如SEQIDNO:1-2所示;在TYLCCNB復制關鍵位點附近選定PAM位點并設計crRNA,構建含該位點的pCambia1300:LbCas12-fgY10b載體所需的2條crRNA鏈:fgY10b-F1R1,其序列如SEQIDNO:3-4所示;將單鏈crRNA合成為雙鏈;在LbCas12a的5’端融合T5核酸酶,并針對TYLCCNV和TYLCCNB的復制關鍵位點同時編輯病毒四個靶點的編輯載體pCambia1300:T5exo-LbCas12-Y10*4;其中,在TYLCCNV復制關鍵位點附近選定PAM位點并設計兩條crRNA,以及在TYLCCNB復制關鍵位點附近選定PAM位點并設計兩條crRNA,并將4條crRNA序列利用錘頭狀核酶HH和丁型肝炎病毒核酶HDV隔開進行串聯,人工合成該序列,命名為Y10*4,其序列如SEQIDNO:5所示;在LbCas12a的5’端融合T5核酸酶,其中LbCas12a和T5核酸酶的序列如SEQIDNO:6-7所示。
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