恭喜內蒙古農業大學劉大程獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜內蒙古農業大學申請的專利一種測定酵母培養物中α-甘露聚糖含量的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119574754B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-05-16發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510138627.1,技術領域涉及:G01N30/02;該發明授權一種測定酵母培養物中α-甘露聚糖含量的方法是由劉大程;張小潔;徐子萱;楊嵐;陳灰設計研發完成,并于2025-02-08向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種測定酵母培養物中α-甘露聚糖含量的方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種測定酵母培養物中α?甘露聚糖含量的方法,屬于化學分析技術領域,方法包括:預處理;水解;衍生化反應;標準曲線的繪制和測定。本發明用于定量分析YC中α?甘露聚糖的含量,該方法將為YC的進一步開發和制備提供重要的參考依據,并為相關領域的發展貢獻更多有價值的科學數據,借助此方法,我們能夠更精確地評估YC中α?甘露聚糖的含量,從而確保產品的質量和功能性聲明的準確性。
本發明授權一種測定酵母培養物中α-甘露聚糖含量的方法在權利要求書中公布了:1.一種測定酵母培養物中α-甘露聚糖含量的方法,其特征在于,包括以下步驟:1預處理:將待測酵母培養物樣品和已知純度的酵母甘露聚糖對照品粉碎后過篩,備用;2水解:稱取預處理后的待測樣品和已知純度的酵母甘露聚糖對照品,分別置于試管中加入濃度為12molL冰硫酸,震蕩混勻后立刻置于冰水中孵育30min,然后向各試管中加入水,混勻后置于沸水浴中孵育30min,將裝有待測樣品試管中的溶液用裝有MES緩沖溶液的水洗瓶轉移至離心管中,將裝有酵母甘露聚糖對照品試管中的溶液用裝有MES緩沖溶液的水洗瓶轉移至錐形瓶中,再然后向離心管和錐形瓶中分別加入氫氧化鈉水溶液,用MES緩沖溶液定容至未超過且接近刻度線,用或不用氫氧化鈉水溶液調節pH至4.5-5.5,最后用MES緩沖溶液定容至刻度,分別取水解后的溶液進行離心,收集上清液至離心管底部,向離心管中加入α-甘露糖苷酶懸浮液的稀釋液充分混勻后置于37℃恒溫水浴鍋中水浴17h,分別得到樣品溶液和對照品溶液;3衍生化反應:取步驟2得到的樣品溶液和對照品溶液分別加入PMP-甲醇溶液和氫氧化鈉水溶液后70℃水浴加熱10min,然后加入鹽酸,再每次用3mL三氯甲烷重復萃取4次,最后取上層水相進行離心,收集上清液針頭式濾膜,得到供試品溶液和供試品對照溶液。4標準曲線的繪制和測定:將甘露糖標準品加入水溶解,配制成1mgmL的標準儲備液,4℃保存,將標準儲備液稀釋成濃度分別為0.5、5、10、50、100、400μgmL的標準系列工作液,現用現配;將標準系列工作液分別按照步驟3進行衍生化反應;將衍生化反應后的標準系列工作液、供試品溶液和供試品對照溶液分別采用高效液相色譜儀進行測定,高效液相色譜條件為:色譜柱:AcclaimTMC30,5μm4.6×250mm液相色譜柱;流動相:濃度為0.1molL、pH為5.5的乙酸銨水溶液和乙腈的體積比為75:25的混合溶液;流速:1.0mLmin;柱溫:35℃;檢測器:紫外檢測器;檢測波長:254nm;進樣量:10μL;對標準系列工作液的甘露糖目標峰進行分析得到色譜峰面積,以標準系列工作液濃度為橫坐標,以標準系列工作液的色譜峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,獲得線性回歸方程,分別對供試品溶液和供試品對照溶液的甘露糖目標峰進行分析得到色譜峰面積,通過線性回歸方程,計算出供試品溶液和供試品對照溶液的甘露糖色譜峰面積對應的濃度,根據公式1-3計算待測酵母培養物樣品中α-甘露聚糖的含量,計算公式為: 式中:Xi-待測樣品中α-甘露聚糖的含量,以質量百分數表示,%;Xi對照-待測酵母甘露聚糖對照品中酵母甘露聚糖的含量,以質量百分數表示,%;c1-供試品溶液中甘露糖色譜峰面積對應的濃度,μgmL;c2-供試品對照溶液中甘露糖色譜峰面積對應的濃度,μgmL;m1-水解稱取待測樣品的質量,g;m2-水解稱取酵母甘露聚糖對照品的質量,g;V1-水解待測樣品定容體積,mL;V2-水解酵母甘露聚糖對照品定容體積,mL;F-待測樣品在試驗過程中α-甘露聚糖被破壞或損耗造成的結果偏低的校正因子;P-酵母甘露聚糖對照品的純度,%;W-酵母甘露聚糖對照品的水分含量,%;n-即8.5,收集上清液制備樣品溶液或對照品溶液,加入α-甘露糖苷酶,再加入PMP-甲醇溶液、氫氧化鈉水溶液和鹽酸后的上清液的體積稀釋倍數;0.9-將甘露糖含量換算成甘露聚糖含量的系數;Xi、Xi對照和F做多個重復測定,F和Xi測定結果以多個重復測定結果的算術平均值±標準差表示,保留3位有效數字;所述α-甘露糖苷酶懸浮液的稀釋液的制備方法包括如下步驟:將1mg,酶活≥15Umg的α-甘露糖苷酶懸浮于NH42SO4濃度為3molL和乙酸鋅濃度為0.1mmolL的混合水溶液中,得到230-250μLpH為7.5的α-甘露糖苷酶懸浮液,向α-甘露糖苷酶懸浮液中加入1mL超純水進行稀釋,4℃儲存,一周內使用完。
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