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龍圖騰網(wǎng)獲悉頂探科技(北京)有限公司申請(qǐng)的專(zhuān)利一種利用哺乳動(dòng)物胚胎培養(yǎng)液檢測(cè)小RNA的方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN110317862B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-13發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為：201810265343.9，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6869；該發(fā)明授權(quán)一種利用哺乳動(dòng)物胚胎培養(yǎng)液檢測(cè)小RNA的方法是由王峙嶠;胡小明設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2018-03-28向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。

本一種利用哺乳動(dòng)物胚胎培養(yǎng)液檢測(cè)小RNA的方法在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明是一種提取檢測(cè)RNA的種類(lèi)及表達(dá)量的方法，特別是提取檢測(cè)細(xì)胞的培養(yǎng)液中微量RNA的方法。多種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)向培養(yǎng)液中分泌微量的RNA分子，本方法是通過(guò)可能含有RNA的樣本特別是細(xì)胞的培養(yǎng)液中的RNA分子3’端與5’端加接頭，繼而進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，再進(jìn)行擴(kuò)增，還可以利用二代測(cè)序的方法對(duì)擴(kuò)增完的DNA產(chǎn)物進(jìn)行分析，從而判斷細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中的RNA的種類(lèi)及表達(dá)量的方法。本發(fā)明的提取擴(kuò)增方法，可以結(jié)合測(cè)序等方法對(duì)RNA檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，可在不破壞原細(xì)胞的情況下獲悉細(xì)胞中的RNA信息。

本發(fā)明授權(quán)一種利用哺乳動(dòng)物胚胎培養(yǎng)液檢測(cè)小RNA的方法在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.一種非診斷和非治療性的提取檢測(cè)微量小分子RNA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：1提供可能含有RNA的樣本，其中，所述樣本是細(xì)胞的培養(yǎng)液，所述細(xì)胞的培養(yǎng)液是受精卵在形成8細(xì)胞前或囊胚期前培養(yǎng)大于等于24小時(shí)的培養(yǎng)液，且所述細(xì)胞的培養(yǎng)液中的RNA包括miRNA，所述miRNA包括miR-372、miR-515、miR-603和miR-191，并且，所述細(xì)胞的培養(yǎng)液中的RNA還包括siRNA、piwiRNA、piRNA、snoRNA、scaRNA、sdRNA、tsRNA中的一種或多種；2加入裂解液和RNA消化酶抑制劑；3加入DNA消化酶消化樣本中的DNA；4加入核糖體RNA抑制引物，其中所述RNA抑制引物是5.8s核糖體RNA抑制引物，其序列為SEQIDNO：1或SEQIDNO：6；5加入3’接頭引物和RNA連接酶，使之連接于樣本中RNA的3’端，其中所述3’接頭引物的序列為SEQIDNO：2或SEQIDNO：7；6加入反轉(zhuǎn)錄引物；7加入5’接頭引物和RNA連接酶，使之連接于樣本中RNA的5’端，其中所述5’接頭引物的序列為SEQIDNO：9或SEQIDNO：10；8加入RNA消化酶抑制劑及反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；9加入RNA消化酶消化樣本中的RNA；10加入正向擴(kuò)增引物和DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；11在步驟10反應(yīng)結(jié)束后，加入反向擴(kuò)增引物、正向擴(kuò)增引物和DNA聚合酶進(jìn)行二次PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

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