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龍圖騰網(wǎng)恭喜中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所;廣西八桂種苗高科技集團(tuán)股份有限公司申請(qǐng)的專利一種發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化方法及其應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN118931951B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-09發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202411244949.6，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/82；該發(fā)明授權(quán)一種發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化方法及其應(yīng)用是由范春節(jié);詹定舉;曾炳山;龐貞武;周長(zhǎng)品;李曉麗設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2024-09-06向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本一種發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化方法及其應(yīng)用在說(shuō)明書摘要公布了：本發(fā)明公開(kāi)了一種發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化方法及其應(yīng)用。本發(fā)明尾巨桉優(yōu)良無(wú)性系DH32?29為外植體材料，通過(guò)篩選外植體的選擇、農(nóng)桿菌菌株類型、菌液濃度、浸染時(shí)間以及處理方式等重要因素進(jìn)一步優(yōu)化了轉(zhuǎn)化體系，建立了高效穩(wěn)定的發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化體系，成功地獲得了再生植株，為今后開(kāi)展桉樹特定基因功能的鑒定和桉樹的遺傳改良奠定基礎(chǔ)。

本發(fā)明授權(quán)一種發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化方法及其應(yīng)用在權(quán)利要求書中公布了：1.一種發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，包括以下步驟：S1.取在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d的增殖苗葉片作為外植體，將表面劃有1-2道傷口的增殖苗葉片外植體置于OD600＝0.3的MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌懸浮液中浸染30min；所述的浸染為浸泡結(jié)合頻率為50Hz的超聲波輔助處理5s，浸泡期間每隔5min震蕩一次；S2.浸染結(jié)束后，用無(wú)菌濾紙吸干外植體表面的懸浮液，隨后置于共培養(yǎng)培養(yǎng)基上并在黑暗條件下共培養(yǎng)3d；所述的共培養(yǎng)培養(yǎng)基的組成如下：20.0gL蔗糖、6.0gL瓊脂粉、50μMAS，余量為WPM；S3.將共培養(yǎng)結(jié)束后的外植體轉(zhuǎn)入毛狀根誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)2-4個(gè)星期，獲得毛狀根；所述的毛狀根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成如下：20.0gL蔗糖、2.5mgLPVP、2.0gLPVPP、0.8gL水解酪蛋白、200mgLCef、6.0gL瓊脂粉，余量為WPM；S4.將毛狀根切成小段，接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)至長(zhǎng)出綠色小芽點(diǎn)后，再將綠色小芽點(diǎn)轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成如下：0.2mgLTDZ、0.2-0.5mgLIBA、20.0gL蔗糖、6.0gL瓊脂粉，余量為WPM；所述的增殖培養(yǎng)基的組成如下：0.5mgL6-BA、0.1mgLNAA、20.0gL蔗糖、6.0gL瓊脂粉，余量為MS培養(yǎng)基；S5.待綠色小芽點(diǎn)長(zhǎng)至2-3cm，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得生根苗；所述的生根培養(yǎng)基的組成如下：0.5mgLIBA、20gL蔗糖、6gL卡拉膠，余量為12MS。

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