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龍圖騰網(wǎng)獲悉深圳華大智造科技股份有限公司申請的專利一種單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN115873922B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-29發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202111141720.6，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6806；該發(fā)明授權(quán)一種單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法是由夏軍;劉萍;趙霞;張?zhí)穹f;宋喆;史千玉;楊新設(shè)計研發(fā)完成，并于2021-09-28向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法。本發(fā)明提供了一種單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法，包括如下步驟：A對單細胞的mRNA進行單細胞標記和U組合標記；B將所述雙標記cDNA進行預擴增、打斷、文庫構(gòu)建，得到單細胞全長轉(zhuǎn)錄本文庫；C測序所述單細胞全長轉(zhuǎn)錄本文庫，實現(xiàn)單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序。本發(fā)明使用胞嘧啶與甲基化胞嘧啶或羥甲基化胞嘧啶可以在重亞硫酸鹽或脫氨酶的作用發(fā)生轉(zhuǎn)化而發(fā)生堿基改變變成T基礎(chǔ)上，使用甲基化胞嘧啶或羥甲基化胞嘧啶在逆轉(zhuǎn)錄時加入到cDNA上的位置組合來對原始的RNA分子進行標記，利用標記來確定測序序列是否來自同一RNA分子，從而組裝成全長轉(zhuǎn)錄本。

本發(fā)明授權(quán)一種單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序方法，包括如下步驟：A對單細胞的mRNA進行雙標記和C轉(zhuǎn)化，得到雙標記cDNA；所述雙標記包括單細胞標記和U組合標記；所述單細胞標記為用帶有單細胞標記序列的PolyT的oligo引物捕獲所述mRNA；所述U組合標記為將所述mRNA在模板轉(zhuǎn)換TSO引物和逆轉(zhuǎn)錄酶作用下進行逆轉(zhuǎn)錄和模板轉(zhuǎn)換反應，且反應時加入甲基化C或羥甲基化C進行實現(xiàn)再次標記，形成帶有甲基化C和非甲基化C組合標記的cDNA；所述C轉(zhuǎn)化為將所述帶有單細胞標記序列以及甲基化C和非甲基化C組合標記的cDNA中的甲基化C轉(zhuǎn)化為U，得到不同位置U堿基和非甲基化C的組合標記的cDNA，記作雙標記cDNA；或所述C轉(zhuǎn)化為將所述帶有單細胞標記序列以及甲基化C和非甲基化C組合標記的cDNA中的非甲基化C轉(zhuǎn)化為U，得到不同位置U堿基和甲基化C的組合標記的cDNA，記作雙標記cDNA；B）將所述雙標記cDNA進行預擴增、打斷、文庫構(gòu)建，得到單細胞全長轉(zhuǎn)錄本文庫；C）測序所述單細胞全長轉(zhuǎn)錄本文庫，實現(xiàn)單細胞全長轉(zhuǎn)錄本建庫測序。

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