恭喜深圳華大智造科技股份有限公司夏軍獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜深圳華大智造科技股份有限公司申請的專利一種單細胞全長轉錄本建庫測序方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115873922B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202111141720.6,技術領域涉及:C12Q1/6806;該發明授權一種單細胞全長轉錄本建庫測序方法是由夏軍;劉萍;趙霞;張恬穎;宋喆;史千玉;楊新設計研發完成,并于2021-09-28向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種單細胞全長轉錄本建庫測序方法在說明書摘要公布了:本發明公開了單細胞全長轉錄本建庫測序方法。本發明提供了一種單細胞全長轉錄本建庫測序方法,包括如下步驟:A對單細胞的mRNA進行單細胞標記和U組合標記;B將所述雙標記cDNA進行預擴增、打斷、文庫構建,得到單細胞全長轉錄本文庫;C測序所述單細胞全長轉錄本文庫,實現單細胞全長轉錄本建庫測序。本發明使用胞嘧啶與甲基化胞嘧啶或羥甲基化胞嘧啶可以在重亞硫酸鹽或脫氨酶的作用發生轉化而發生堿基改變變成T基礎上,使用甲基化胞嘧啶或羥甲基化胞嘧啶在逆轉錄時加入到cDNA上的位置組合來對原始的RNA分子進行標記,利用標記來確定測序序列是否來自同一RNA分子,從而組裝成全長轉錄本。
本發明授權一種單細胞全長轉錄本建庫測序方法在權利要求書中公布了:1.一種單細胞全長轉錄本建庫測序方法,包括如下步驟:A對單細胞的mRNA進行雙標記和C轉化,得到雙標記cDNA;所述雙標記包括單細胞標記和U組合標記;所述單細胞標記為用帶有單細胞標記序列的PolyT的oligo引物捕獲所述mRNA;所述U組合標記為將所述mRNA在模板轉換TSO引物和逆轉錄酶作用下進行逆轉錄和模板轉換反應,且反應時加入甲基化C或羥甲基化C進行實現再次標記,形成帶有甲基化C和非甲基化C組合標記的cDNA;所述C轉化為將所述帶有單細胞標記序列以及甲基化C和非甲基化C組合標記的cDNA中的甲基化C轉化為U,得到不同位置U堿基和非甲基化C的組合標記的cDNA,記作雙標記cDNA;或所述C轉化為將所述帶有單細胞標記序列以及甲基化C和非甲基化C組合標記的cDNA中的非甲基化C轉化為U,得到不同位置U堿基和甲基化C的組合標記的cDNA,記作雙標記cDNA;B)將所述雙標記cDNA進行預擴增、打斷、文庫構建,得到單細胞全長轉錄本文庫;C)測序所述單細胞全長轉錄本文庫,實現單細胞全長轉錄本建庫測序。
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