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龍圖騰網恭喜浙江科技大學申請的專利一種利用磁性納米支原體蛋白廣譜分離抗體的方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN118955726B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-18發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202411437990.5，技術領域涉及：C07K17/14；該發明授權一種利用磁性納米支原體蛋白廣譜分離抗體的方法是由王宏鵬;阿列克謝·塔拉巴羅夫;楊佳瑤;肖竹錢;王行行;陳奎藝;江婧;盧宣羽;程逸菲;黃俊設計研發完成，并于2024-10-15向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種利用磁性納米支原體蛋白廣譜分離抗體的方法在說明書摘要公布了：本申請公開了一種利用磁性納米支原體蛋白廣譜分離抗體的方法，具體涉及抗體純化方法領域，該方法包括如下步驟：S01、磁性納米材料的制備Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+的合成。S02、支原體蛋白M的表達與純化；S03、支原體蛋白M在NiNP上的固定化。S04、MNiNP對目標抗體的分離純化。該方法可實現一種材料方法分離不同類型抗體蛋白的優點。

本發明授權一種利用磁性納米支原體蛋白廣譜分離抗體的方法在權利要求書中公布了：1.一種利用磁性納米支原體蛋白廣譜分離抗體的方法，其特征在于，包括如下步驟：S01、磁性納米材料Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+的合成，記為NiNP；NiNP的合成步驟包括：S01.1、Fe3O4納米顆粒的合成將FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O溶解在去離子水中，得到混合溶液；在氬氣保護條件下，將氨水滴加入混合溶液中，在60-65℃下以250rpm攪拌10-12h，得到Fe3O4納米顆粒粗品；Fe3O4納米顆粒粗品經外磁體收集后，用去離子水洗滌至中性后再用50%乙醇溶液洗10-15次，在60℃下真空干燥12-24h，得到所述的Fe3O4納米顆粒；S01.2、Fe3O4@SiO2的合成將所述的Fe3O4納米顆粒分散在乙醇中，并加入去離子水和氨水，室溫超聲30min內滴加1.5mL硅酸四乙酯，再超聲15min；將上述得到的混合物25℃下300rpm攪拌12h，得到Fe3O4@SiO2粗品；將Fe3O4@SiO2粗品經外磁體收集后，用去離子水洗滌10-15次，在60℃下真空干燥12-24h，得到Fe3O4@SiO2；S01.3、Fe3O4@SiO2–APTMS的合成將Fe3O4@SiO2分散在甲苯中，滴加3-氨基丙基三甲氧基硅烷，在氬氣保護條件下95℃回流12h，得到Fe3O4@SiO2–APTMS粗品；將Fe3O4@SiO2–APTMS粗品經外磁體收集后，用純甲醇洗滌3-5次，在60℃下真空干燥12h，得到Fe3O4@SiO2–APTMS；S01.4、Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+的合成將得到的Fe3O4@SiO2-APTMS分散在溶解氯乙酸鈉的乙醇和三乙胺的混合溶液中，在氬氣保護條件下80℃回流12h得到Fe3O4@SiO2-PIDA粗品；Fe3O4@SiO2-PIDA粗品分別用純甲醇和去離子水洗滌5-10次，得到純凈的Fe3O4@SiO2-PIDA；將純凈的Fe3O4@SiO2-PIDA分散在NiSO4·6H2O溶液中，在25℃下震蕩12h，得到Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+粗品；Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+粗品用去離子水洗滌3-5次，得到純凈的Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+；S02、支原體蛋白M-8his的表達與純化；S02.1、將pET28a-M-8his質粒轉化進大腸桿菌細胞中，將大腸桿菌細胞分散在含有50μgmL卡那霉素的LB平板上，37℃孵育過夜，得到大腸桿菌菌落；S02.2、取單個大腸桿菌菌落，轉移到含有50μgmL卡那霉素的5mL培養液中，在37℃，200rpm下孵育過夜；S02.3、將上述得到的培養物轉移到2YT培養基中，孵育至OD600在0.5~0.6時，加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷促進誘導，在20℃，200rpm下孵育16~18h，得到表達目標蛋白的大腸桿菌菌落；S02.4、收集上述大腸桿菌細胞在4℃、8000rpm離心10min，用緩沖溶液重懸，高壓勻漿裂解后，得到細胞裂解液；S02.5、細胞裂解液在4℃、8000rpm離心1h，上清液用0.22μm濾膜過濾，得到帶有支原體蛋白M-8his的溶液；S03、支原體蛋白M-8his在磁性納米材料Fe3O4@SiO2–PIDA–Ni2+上的固定化，記為MNiNP；S04、通過外部磁體分離吸附有目標抗體的MNiNP，洗脫，得到純化后的目標抗體；MNiNP經洗脫后可復用；所述支原體蛋白M-8his的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

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