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龍圖騰網恭喜浙江熙正霖生物科技有限公司申請的專利一種產四氫嘧啶基因工程菌的構建方法及其應用獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN119120536B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-18發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202411616610.4，技術領域涉及：C12N15/70；該發明授權一種產四氫嘧啶基因工程菌的構建方法及其應用是由羅茂行;王甜憶;吳紅軍;劉迎賓;賀東洋;李舜設計研發完成，并于2024-11-13向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種產四氫嘧啶基因工程菌的構建方法及其應用在說明書摘要公布了：本發明公開了一種產四氫嘧啶基因工程菌的構建方法及其應用，屬于生物合成領域。本發明以大腸桿菌BL21為出發菌株，敲除大腸桿菌BL21的lacI基因，構建色氨酸調控的表達系統，能夠在不添加誘導劑的情況下調控產物四氫嘧啶的合成。本發明通過對大腸桿菌BL21的磷酸轉移酶系統進行改造，在ptsG基因位點整合葡萄糖易化體蛋白編碼基因Zmglf，解除碳分解代謝抑制作用，降低了培養基成本。通過過表達磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶編碼基因ppc和天冬氨酸半醛脫氫酶編碼基因asd，增強了生長代謝過程中前體物質草酰乙酸和L?天冬氨酸?β?半醛的積累，提高了產物四氫嘧啶的合成水平。

本發明授權一種產四氫嘧啶基因工程菌的構建方法及其應用在權利要求書中公布了：1.一種四氫嘧啶的生物合成方法，其特征在于，采用產四氫嘧啶基因工程菌進行四氫嘧啶的生物合成；在基礎發酵培養基中添加色氨酸，通過色氨酸阻遏四氫嘧啶產物的合成，使菌體生長繁殖；當基礎發酵培養基中的碳源耗盡、溶氧回升時開始持續加入補料培養基，所述補料培養基中不含色氨酸，四氫嘧啶合成啟動，生產四氫嘧啶；所述基礎發酵培養基配方：酵母浸粉7~10gL，硫酸銨5~8gL，玉米漿干粉5~8gL，玉米芯水解液折合總還原糖13~20gL，磷酸二氫鉀2~3gL，磷酸氫二鉀2~3gL，硫酸鎂0.5~1.5gL，檸檬酸1~1.5gL，硫酸亞鐵0.01~0.02gL，硫酸錳0.01~0.02gL，L-色氨酸0.1~0.2gL；所述補料培養基配方：酵母浸粉5~7gL，玉米芯水解液折合總還原糖500~600gL，硫酸鎂2~3gL；所述產四氫嘧啶基因工程菌采用如下方法構建：S1：合成SEQIDNO.1所示的trpR-Ptrp-T7polymerase基因片段，將質粒pRSFDuet的lacI基因使用所述trpR-Ptrp-T7polymerase基因片段進行替換，獲得重組質粒pRSFDuet*；S2：合成SEQIDNO.2所示的四氫嘧啶合成基因簇片段HhectABC，將其連接于質粒pRSFDuet*的第一個T7啟動子下游，獲得重組質粒pRSFDuet*-HhectABC；S3：以大腸桿菌BL21的基因組為模板，獲得磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶ppc基因片段和SEQIDNO.3所示的天冬氨酸半醛脫氫酶asd基因片段，再通過重疊PCR擴增獲得ppc-asd基因片段，將其連接于重組質粒pRSFDuet*-HhectABC的第二個T7啟動子下游，獲得重組質粒pRSFDuet*-HhectABC-ppc-asd；S4：對大腸桿菌BL21的lacI基因進行敲除，獲得大腸桿菌BL21ΔlacI；合成SEQIDNO.4所示的葡萄糖易化體蛋白編碼基因Zmglf；將Zmglf基因整合到大腸桿菌BL21ΔlacI基因組的ptsG基因位點，獲得磷酸轉移酶系統改造的大腸桿菌BL21ΔlacIΔptsG::Zmglf；S5：將大腸桿菌BL21ΔlacIΔptsG::Zmglf制備電轉感受態細胞，將重組質粒pRSFDuet*-HhectABC-ppc-asd轉化感受態細胞，得到產四氫嘧啶工程菌。

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