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龍圖騰網(wǎng)獲悉四川農(nóng)業(yè)大學(xué)申請的專利用于檢測AcVA、ACVB和AcCRaV三種獼猴桃病毒的引物和檢測方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN117025839B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-15發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202310714817.4，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/70；該發(fā)明授權(quán)用于檢測AcVA、ACVB和AcCRaV三種獼猴桃病毒的引物和檢測方法是由尚靜;魏燦;張瀟;王鈺南設(shè)計研發(fā)完成，并于2023-06-15向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本用于檢測AcVA、ACVB和AcCRaV三種獼猴桃病毒的引物和檢測方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種用于檢測AcVA、ACVB和AcCRaV三種獼猴桃病毒的引物和檢測方法，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明使用三對引物通過多重RT?PCR同時檢測獼猴桃的三種病毒：獼猴桃病毒AAcVA、獼猴桃病毒BAcVB和獼猴桃褪綠環(huán)斑相關(guān)病毒AcCRaV，三對引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1～6所示，本發(fā)明還對多重RT?PCR的退火溫度、延伸時間、循環(huán)次數(shù)、引物類型和濃度進(jìn)行了優(yōu)化，采用本發(fā)明方法可成功應(yīng)用于田間樣品病毒檢測，有效提高檢測效率，縮短檢測時間，節(jié)約檢測成本。

本發(fā)明授權(quán)用于檢測AcVA、ACVB和AcCRaV三種獼猴桃病毒的引物和檢測方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種檢測AcVA、ACVB和AcCRaV三種獼猴桃病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）以待測樣品總RNA為模板，對其進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA；（2）以步驟（1）得到的cDNA為模板，利用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測，根據(jù)是否擴(kuò)增出相應(yīng)條帶判斷是否感染所述病毒；其中，所述引物的核苷酸序列分別為：AcVA-F：5’-CATGGCAAAGAATATCTCAAG-3’；AcVA-R：5’-AGATCCAACCCAGAGTTGAAA-3’；AcVB-F：5’-GTTATGCCAAACGTTTATGA-3’；AcVB-R：5’-CTCCTCGCAAACGAACTC-3’；AcCRaV-F：5’-TTAAGTAGAAGAACCACAATAT-3’；AcCRaV-R：5’-ATGCCAAAGCCTATGCAAG-3’；所述步驟（1）中反轉(zhuǎn)錄是以所述引物的3個下游引物等體積混合的組合物作為引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，引物濃度為10~30μM；所述步驟（2）中進(jìn)行PCR擴(kuò)增的上游引物為所述引物的3個上游引物等體積比混合，下游引物為所述引物的3個下游引物等體積比混合；所述PCR反應(yīng)的體系為2×TaqPCRMasterMix，12~13μL；cDNA，0.8~1.2μL；上下游引物各0.8~1.2μL，補ddH2O至24~26μL；所述PCR反應(yīng)程序為：93~95°C預(yù)變性2~4min；93~95°C變性25~35s；46.3°C退火25~35s；70~74°C延伸50s；35個循環(huán)；70~74°C延伸8~12min。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)＠麢?quán)人四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，其通訊地址為：625014 四川省雅安市雨城區(qū)新康路46號；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。