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龍圖騰網恭喜廣東工業大學申請的專利一種深海甲烷滲漏區雙殼貝類體內微塑料的分尺寸層級遞進提取和鑒別方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN119086205B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-04-04發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202411192030.7，技術領域涉及：G01N1/28；該發明授權一種深海甲烷滲漏區雙殼貝類體內微塑料的分尺寸層級遞進提取和鑒別方法是由馮景春;黎燦榮;蔡珈穎;張偲;楊志峰設計研發完成，并于2024-08-28向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種深海甲烷滲漏區雙殼貝類體內微塑料的分尺寸層級遞進提取和鑒別方法在說明書摘要公布了：本發明公開了一種深海甲烷滲漏區雙殼貝類體內微塑料的分尺寸層級遞進提取和鑒別方法。本發明提出的方法將生物組織冷凍干燥脫水、使用pH階段性增強酶?過氧化氫混合消解液、層級遞進真空抽濾、分尺寸優勢鑒定等若干實驗步驟將極端環境中雙殼貝類蘊含的微塑料無損且分類提取而出，目的在于實現雙殼貝類體內全尺寸微塑料分尺寸范圍進行定量和定性分析。本發明適用于探尋深海極端生態系統中雙殼貝類各組織富集微塑料的表征方法，搭配捕獲的海底貝類床層，進而推演到整個極端生態系統吸納微塑料的時間歷程及歷史積累量，解決在深海極端環境中大規模采樣提取分析的難題，為特定海域微塑料污染歷史的影響提供科學的檢驗方略。

本發明授權一種深海甲烷滲漏區雙殼貝類體內微塑料的分尺寸層級遞進提取和鑒別方法在權利要求書中公布了：1.一種深海甲烷滲漏區雙殼貝類體內微塑料的分尺寸層級遞進提取和鑒別方法，其特征在于，包括如下步驟：S1、冷凍保存：將捕獲的雙殼貝類冷凍保存；S2、組織預處理：將步驟S1冷凍保存的雙殼貝類經恒溫解凍、密閉解剖后，得到雙殼貝類的各類生物組織，雙殼貝類的各類生物組織經冷凍干燥后待用；S3、酶溶液預消解：向步驟S2得到的雙殼貝類的各類生物組織中加入供消解的胰蛋白酶溶液消解，得到具有較多組織絲狀凝結體的酶溶液一次消解液，所述的胰蛋白酶溶液由如下步驟配制：稱取磷酸二氫鉀6.80g，加水500mL使其溶解，再用0.1molL氫氧化鉀溶液調節pH至7.5，加入胰蛋白酶30.00g，加水溶解后，稀釋至1L，即得所述的胰蛋白酶溶液；S4、pH階段性增強：使用pH調諧液將步驟S3得到的酶溶液一次消解液pH調整到7.5，再向酶消解液中若干次加入胰蛋白酶溶液以加速絲狀凝結體的解體，得到酶溶液二次消解液，每次加入的胰蛋白酶溶液的體積是步驟S3中供消解的胰蛋白酶溶液的體積的13-14；所述的pH調諧液為質量濃度為0.0136gmL的磷酸二氫鉀溶液或質量濃度為0.0562gmL的氫氧化鉀溶液；所述的胰蛋白酶溶液由如下步驟配制：稱取磷酸二氫鉀6.80g，加水500mL使其溶解，再用0.1molL氫氧化鉀溶液調節pH至7.5，加入胰蛋白酶30.00g，加水溶解后，稀釋至1L，即得所述的胰蛋白酶溶液；S5、30%過氧化氫消解：將步驟S4得到的酶溶液二次消解液中的絲狀凝結體挑出，向絲狀凝結體中加入質量分數為30%的過氧化氫溶液，于60℃-65℃下消解殘留的細胞粘接物，持續2-4h，直至消解液無氣泡產生，即完全消解獲得無明顯懸浮物的近乎透明溶液，得到過氧化氫消解液；S6、混合消解液分尺寸層級遞進提取：將步驟S4得到的酶溶液二次消解液以及步驟S5得到的過氧化氫消解液混合，進行第一尺寸層級提取，使＞10μm的所有目標物全部富集至濾膜上，得到第一尺寸層級提取濾膜，再將第一層級過濾液進行第二尺寸層級提取，使1~10μm的所有目標物全部富集至濾膜上，得到第二尺寸層級提取濾膜，再將第二層級過濾液進行第三尺寸層級提取，使0.1~1μm的所有目標物全部富集至濾膜上，得到第三尺寸層級提取濾膜；S7、對步驟S6得到的第一尺寸層級提取濾膜、第二尺寸層級提取濾膜和第三尺寸層級提取濾膜中的微塑料依次通過特征觀測、微觀成像和組分光譜檢測，獲取雙殼貝類體內各生物組織全尺寸微塑料的分尺寸豐度信息，具體包括如下步驟：S71、將第一尺寸層級提取濾膜拆分成粒徑大于500μm的大尺寸微塑料濾膜和粒徑為10~500μm的中尺寸濾膜，對粒徑大于500μm的大尺寸微塑料濾膜的微塑料進行紅外成像并定性分析其分布情況，獲取整個疑似微塑料的組分類型均一程度以及確定疑似微塑料的聚合物的類型，對粒徑為10~500μm的中尺寸濾膜的微塑料進行微觀紅外成像并定性其組分，統計出其技術參數，技術參數包括顆粒數、顆粒直徑、等效面積；S72、對第二尺寸層級提取濾膜的粒徑為1~10μm的小尺寸微塑料進行形態學觀測、顯微成像和組分分析，統計所有小尺寸微塑料的尺寸、顏色、形狀、等效直徑、顆粒數并進行拉曼成像獲取組分分布信息；S73、對第三尺寸層級提取濾膜的粒徑為0.1~1μm的亞微米尺寸微塑料進行形態學觀測、顯微成像和組分分析，統計所有亞微米尺寸微塑料的尺寸、顏色、形狀、顆粒數并進行顯微成像獲取組分分布信息。

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