恭喜浙江博真生物科技有限公司倪萬茂獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜浙江博真生物科技有限公司申請的專利一種基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119178710B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-25發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411656066.6,技術領域涉及:G01N15/14;該發明授權一種基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法是由倪萬茂;遲妍妍;林鵬程;倪匯熙;倪成根;倪聲雷;陳樂芝;朱怡婕;陳鵬貴設計研發完成,并于2024-11-19向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法在說明書摘要公布了:本發明涉及DNA倍體檢測技術領域,具體地說,涉及一種基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法。其包括步驟一、試劑準備;步驟二、尿液濃縮;步驟三、細胞清洗;步驟四、加入固定液;步驟五、固定細胞;步驟六、再次清洗;步驟七、染色;步驟八、上機檢測;該基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法中,通過控制試劑用量及儲存條件,確保了試劑的有效性和穩定性,在實驗過程中,精確的尿液濃縮、細胞清洗、固定及染色步驟,提高了檢測的準確性,例如,對不同細胞密度的樣本有針對性的處理方法,同時,細胞固定與染色的二次結合,確保了細胞DNA的特異性染色,從而提高了分析DNA倍體性質的準確性。
本發明授權一種基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法在權利要求書中公布了:1.一種基于流式細胞術檢測DNA倍體的方法,其特征在于,由以下步驟組成:S1、試劑準備:尿液、核酸染料、固定液、清洗液,所述核酸染料的主要成分為PI;其中,尿液的用量為50mL;核酸染料的用量為0.6mL,核酸染料在2℃-8℃冷藏保存,避免光照;固定液的用量為1.2mL,固定液在2℃-8℃冷藏保存;清洗液每次的用量為2.5mL;S2、尿液濃縮:將尿液倒入容器中,使用離心濃縮裝置進行濃縮,濃縮過程中注意觀察尿液的體積變化確保濃縮效果達到要求,濃縮完成后,將上清液吸出棄去,避免擾動底部的細胞沉淀,保留底部的細胞;S3、細胞清洗:在含有細胞沉淀的容器中加入清洗液,使用離心機進行離心工作,離心機的離心速度為245g,離心機的離心時間為6min,離心過程中確保離心機的平衡,再吸取上清液棄去,去除干凈,重復上述步驟1-2次;S4、加入固定液:晃動含有細胞沉淀的容器,使細胞分散均勻,再將容器放置在震蕩器上,震蕩器的震蕩頻率為110rmin,邊振蕩邊加入固定液,加入固定液的速度為每秒2滴,避免產生氣泡;S5、固定細胞:將加入固定液的容器放入冰箱中進行固定,冰箱的溫度控制在3℃,放入冰箱中固定的時間為10h;如果需要長期保存,可以將加入固定液的容器放入-20℃冰箱中,能夠至少保存一年,在保存過程中,應確保樣本密封良好,避免污染;S6、再次清洗:從冰箱中取出容器,重復3-4次S3中的清洗步驟;S7、染色:去除上清液后,將容器放在震蕩器上,邊振蕩容器邊緩慢加入核酸染料,確保細胞與染色液充分接觸,隨后將容器放在室溫、避光環境中作用15min,染色過程中使用遮光材料覆蓋容器;S8、上機檢測:上機檢測前,對容器進行振蕩,使細胞均勻分布在溶液中,再采用流式細胞儀對細胞進行檢測,減少對細胞的損傷,并對數據進行分析,仔細觀察并排除碎片、粘連體,準確確定G0G1峰的位置,當細胞密度相對一致時,可參考相鄰正常樣本進行對比分析;如果密度相差較多,則需另做一管混入正常人全血的樣本,以確認G0G1峰位置。
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