恭喜中國科學院大連化學物理研究所周雍進獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜中國科學院大連化學物理研究所申請的專利一種工程菌的構建方法及其應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116262929B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-21發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202111539688.7,技術領域涉及:C12N15/81;該發明授權一種工程菌的構建方法及其應用是由周雍進;曹選設計研發完成,并于2021-12-15向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種工程菌的構建方法及其應用在說明書摘要公布了:本申請公開一種工程菌的構建方法及其應用。所述構建方法包括以下步驟:在宿主菌株中導入DNA片段I,得到所述工程菌;所述DNA片段I從上游到下依次包括:啟動子、融合基因、終止子;所述融合基因從上游到下依次包括:TPS基因、連接肽I的編碼基因、LPPS基因;所述宿主菌株選自釀酒酵母中的任一種。所述構建方法優化了宿主菌株的香紫蘇醇合成酶,有利于提高香紫蘇醇的產率。
本發明授權一種工程菌的構建方法及其應用在權利要求書中公布了:1.一種工程菌的構建方法,其特征在于,所述構建方法包括以下步驟:在宿主菌株中導入DNA片段I,得到所述工程菌;所述DNA片段I從上游到下依次包括:啟動子、融合基因、終止子;所述宿主菌株為CEN.PK113-11C菌株;所述融合基因從上游到下依次包括: MBP基因、連接肽II的編碼基因、TPS基因、連接肽I的編碼基因、LPPS基因;所述LPPS基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示;所述TPS基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示;所述MBP基因的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示;所述連接肽I的編碼基因的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示;所述連接肽II的編碼基因的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示;所述啟動子選自PeTDH3、PGAL7中的任意一種;所述終止子選自TPYX212、TADH1中的任意一種;所述在宿主菌株中導入DNA片段I為將DNA片段I整合到宿主的XI-3基因位點;所述構建方法還包括優化MVA的合成途徑,包括(a)~(h):(a)敲除宿主菌株的GAL80基因;(b)將含有FAA4-TAHD1-PTHD3-tHMG1的DNA片段整合到宿主菌株的FAA4基因位點;(c)將含有POX1-TTDH2-PtHXT7-SpHMGR的DNA片段整合到宿主菌株的POX1基因位點;SpHMGR來源于SilicibacterpomeroyiNADH依賴型SpHMGR;(d)將宿主菌株基因組上ERG20基因突變為ERG20F96C基因;(e)將含有TENO2-HMG2K6R-PGAL10-1-ERG10-TPYK1的DNA片段整合到宿主菌株的XII-2基因位點;(f)將含有TPDC1-HMG2K6R-PGAL10-1-HMG2K6R-TENO2的DNA片段整合到宿主菌株的XII-3基因位點;(g)將宿主菌株中ERG9基因的啟動子替換為PHXT1;(h)將含有PGAL7-BTS1-PaGGPPS-TTDH2的DNA片段整合到宿主菌株的XI-2基因位點;BTS1-PaGGPPS來自Phomopsisamygdali的GGPP合成酶融合蛋白基因BTS1-PaGGPPS;所述(a)~(h)不分先后順序,得到工程菌CXM17;所述(a)~(h)中,基因來源如下: 所述SpHMGR基因的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示;所述BTS1-PaGGPPS基因的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示;所述構建方法還包括在工程菌CXM17的基礎上進行優化中心代謝途徑,包括(A)~(N):(A)將含有HIS3-PTPI1-MmACL-TFBA1-PTDH3-RtME-TCYC1-PtHXT7-’MDH3-TTDH2-PPGK1-CTP1-TADH1的DNA片段整合到工程菌CXM17的HIS3基因位點;(B)將工程菌CXM17的PYC1基因的啟動子PPYC1替換為啟動子PTEF1;(C)將含有PtHXT7-MPC3-TDIT1-TMPC1-MPC1-PTPI1的DNA片段整合到工程菌CXM17的XI-4位點;(D)將含有TCYC1-AnACLa-PGAL1-PGAL10-AnACLb-TADH1的DNA片段整合到工程菌CXM17的X2位點;(E)將含有PTPI1-RtCIT1-TFBA1-TCYC1-IDP2-PTHD3-PTEF1-YHM2的DNA片段整合到工程菌CXM17的GAL1、GAL7、GAL10位點;(F)將含有PCOX9-TCYC1-GND1-PTHD3-PtHXT7-TKL1-TTDH2-TADH1-TAL1-PPGK1-PTEF1-ZWF1-TZWF1的DNA片段整合到工程菌CXM17的PGI1位點;(G)將工程菌CXM17的IDH2基因的啟動子替換為啟動子PGSY1;所述(A)~(G)不分先后順序,得到工程菌SCX38;所述(A)~(G)中,基因來源如下:
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