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龍圖騰網(wǎng)恭喜中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院;生物島實(shí)驗(yàn)室申請的專利非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN114609306B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-03-21發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號(hào)為：202210220908.8，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N30/06；該發(fā)明授權(quán)非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法是由張小飛;孫明偉;張青;鄔文峰;黃秋玲設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-03-08向國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種非抗體依賴的蛋白質(zhì)泛素化修飾富集方法，包括全蛋白質(zhì)提取、蛋白水平自由氨基完全封閉、底物蛋白上泛素鏈水解、含有可富集標(biāo)簽試劑標(biāo)記泛素化修飾位點(diǎn)處的自由氨基、蛋白質(zhì)的酶切、標(biāo)記的泛素化修飾肽段的富集。本發(fā)明還涉及檢測方法，即對富集后的泛素化修飾肽段通過液相?質(zhì)譜檢測。本發(fā)明不需要利用抗體識(shí)別酶切后產(chǎn)生的泛素殘留基序，即可實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)泛素化修飾的無差別富集及鑒定。

本發(fā)明授權(quán)非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種蛋白質(zhì)泛素化修飾富集方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、從待檢測生物樣品中提取獲得全蛋白質(zhì)樣品：利用7-9M尿素重懸待檢測樣品，再通過超聲進(jìn)一步裂解并釋放細(xì)胞或組織中全蛋白，離心后取上清，即得；S2、在全蛋白質(zhì)樣品中加入濃度為10-200mM的氨基活性試劑，加入濃度為5-100mM的氰基硼氫化鈉，在16℃-80℃條件下，封閉0.25-12h，得到底物蛋白；將溶液中尿素濃度稀釋至2M或以下；S3、對封閉后的底物蛋白進(jìn)行泛素鏈水解：底物蛋白中加入去泛素化家族酶，進(jìn)行酶切，得到泛素化位點(diǎn)修飾處賴氨酸的ε氨基暴露的S3樣品；所述去泛素化家族酶包括USP家族酶；所述USP家族酶包括USP1、USP2、USP4、USP5、USP6、USP7、USP8、USP9x、USP10、USP15、USP16、USP20、USP21、USP25、USP27x、USP28中的一種或多種；S4、用含有可富集標(biāo)簽試劑標(biāo)記泛素化修飾賴氨酸的ε氨基位點(diǎn)，得到S4樣品；S5、對S4樣品進(jìn)行蛋白水解酶進(jìn)行酶切，得到S5樣品；S6、對應(yīng)S4中可富集標(biāo)簽的方式，將S5樣品中標(biāo)記的泛素化修飾肽段進(jìn)行富集；其中，S4步驟中所述可富集標(biāo)簽的試劑為有生物素標(biāo)簽的氨基活性試劑，S6步驟中的富集標(biāo)記肽段的材料為鏈霉素親和素基質(zhì)材料。

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