恭喜中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院;生物島實驗室張小飛獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院;生物島實驗室申請的專利非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN114609306B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-21發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202210220908.8,技術領域涉及:G01N30/06;該發明授權非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法是由張小飛;孫明偉;張青;鄔文峰;黃秋玲設計研發完成,并于2022-03-08向國家知識產權局提交的專利申請。
本非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種非抗體依賴的蛋白質泛素化修飾富集方法,包括全蛋白質提取、蛋白水平自由氨基完全封閉、底物蛋白上泛素鏈水解、含有可富集標簽試劑標記泛素化修飾位點處的自由氨基、蛋白質的酶切、標記的泛素化修飾肽段的富集。本發明還涉及檢測方法,即對富集后的泛素化修飾肽段通過液相?質譜檢測。本發明不需要利用抗體識別酶切后產生的泛素殘留基序,即可實現蛋白質泛素化修飾的無差別富集及鑒定。
本發明授權非抗體依賴的泛素化修飾富集方法和檢測方法在權利要求書中公布了:1.一種蛋白質泛素化修飾富集方法,其特征在于,包括以下步驟:S1、從待檢測生物樣品中提取獲得全蛋白質樣品:利用7-9M尿素重懸待檢測樣品,再通過超聲進一步裂解并釋放細胞或組織中全蛋白,離心后取上清,即得;S2、在全蛋白質樣品中加入濃度為10-200mM的氨基活性試劑,加入濃度為5-100mM的氰基硼氫化鈉,在16℃-80℃條件下,封閉0.25-12h,得到底物蛋白;將溶液中尿素濃度稀釋至2M或以下;S3、對封閉后的底物蛋白進行泛素鏈水解:底物蛋白中加入去泛素化家族酶,進行酶切,得到泛素化位點修飾處賴氨酸的ε氨基暴露的S3樣品;所述去泛素化家族酶包括USP家族酶;所述USP家族酶包括USP1、USP2、USP4、USP5、USP6、USP7、USP8、USP9x、USP10、USP15、USP16、USP20、USP21、USP25、USP27x、USP28中的一種或多種;S4、用含有可富集標簽試劑標記泛素化修飾賴氨酸的ε氨基位點,得到S4樣品;S5、對S4樣品進行蛋白水解酶進行酶切,得到S5樣品;S6、對應S4中可富集標簽的方式,將S5樣品中標記的泛素化修飾肽段進行富集;其中,S4步驟中所述可富集標簽的試劑為有生物素標簽的氨基活性試劑,S6步驟中的富集標記肽段的材料為鏈霉素親和素基質材料。
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