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恭喜山東泓達生物科技有限公司;山東昆達生物科技有限公司熊傳波獲國家專利權

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龍圖騰網恭喜山東泓達生物科技有限公司;山東昆達生物科技有限公司申請的專利一株高效生產依克多因的基因工程菌及其制備和應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116987649B

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-21發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310339081.7,技術領域涉及:C12N1/21;該發明授權一株高效生產依克多因的基因工程菌及其制備和應用是由熊傳波;杜敬彩;劉瑞艷;嚴立恩;陸敏設計研發完成,并于2023-04-01向國家知識產權局提交的專利申請。

一株高效生產依克多因的基因工程菌及其制備和應用在說明書摘要公布了:本發明提出了一株高效生產依克多因的基因工程菌及其制備和應用,其特征在于,所述基因工程菌以大腸桿菌MG1655,編號為ATCC47076為宿主,其包含如下改造:基于丙酮酸響應轉錄因子PdhR,在T7啟動子的下游通過融合PCR的方法插入PdhR結合位點PdhRBox,使其轉錄受到丙酮酸響應轉錄因子PdhR抑制,利用試劑盒ClonExpress通過無縫克隆的方法構建得到受丙酮酸調控的Ppr啟動子;外源引入T7RNAP,在PxylF下表達;外源引入密碼子優化的ectABC基因簇,一個拷貝在T7啟動子下,另一個拷貝在構建的受丙酮酸調控的強啟動子Ppr啟動子下;在Ppr控制下增量表達磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因ppc和天冬氨酸激酶基因lysC;通過反義轉錄抑制thrA、lysA、iclR和zwf基因的表達。本申請工程菌能夠生產依克多因,并具有較高的產量。

本發明授權一株高效生產依克多因的基因工程菌及其制備和應用在權利要求書中公布了:1.一株高效生產依克多因的基因工程菌,所述基因工程菌以大腸桿菌MG1655,編號為ATCC47076為宿主,其特征在于,A)基于丙酮酸響應轉錄因子PdhR,在T7啟動子的下游通過融合PCR的方法插入PdhR結合位點PdhRBox,使其轉錄受到丙酮酸響應轉錄因子PdhR抑制,利用試劑盒ClonExpress通過無縫克隆的方法構建得到受丙酮酸調控的Ppr啟動子;B)外源引入T7RNAP,在PxylF下表達;C)外源引入密碼子優化的ectABC基因簇,一個拷貝在T7啟動子下,另一個拷貝在構建的受丙酮酸調控的強啟動子Ppr啟動子下;在Ppr控制下增量表達磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因ppc和天冬氨酸激酶基因lysC;D)通過反義轉錄抑制thrA和lysA的表達,減少蘇氨酸、蛋氨酸、賴氨酸代謝支路的流量并減少其反饋抑制;通過反義轉錄抑制iclR基因的表達,激活乙醛酸途徑,提高重要的前體草酰乙酸的積累;通過反義轉錄抑制zwf基因的表達,減少6-磷酸葡萄糖到HMP途徑的代謝流量;所述密碼子優化的ectABC基因簇將原始外源基因ectABC基因簇序列通過成型的規則修改部分密碼子,使其適合大腸桿菌表達的方法,最終人工合成出密碼子的DNA片段ectOPT;所述密碼子優化的ectABC基因簇為ectOPT,其核苷酸序列為序列表SEQIDNo.1所示;所述T7啟動子的核苷酸序列為序列表SEQIDNo.2所示;T7終止子的核苷酸序列為序列表SEQIDNo.3所示;所述PxylF基因的核苷酸序列為序列表SEQIDNo.5所示;所述RNAP基因的核苷酸序列為序列表SEQIDNo.6所示;所述thrA基因的GeneID為945803,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.11所示;所述lysA基因的GeneID為947313,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.12所示;所述iclR基因的GeneID為948524,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.13所示;所述zwf基因的GeneID為946370,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.14所示;所述ppc基因的GeneID為948457,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.15所示;所述lysC基因的GeneID為948531,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.16所示;所述PdhR基因的GeneID為944827,核苷酸序列為序列表SEQIDNo.17所示;所述Ppr啟動子的核苷酸序列為序列表SEQIDNo.18所示。

如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術,可聯系本專利的申請人或專利權人山東泓達生物科技有限公司;山東昆達生物科技有限公司,其通訊地址為:276400 山東省臨沂市沂水縣工業園;或者聯系龍圖騰網官方客服,聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。

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