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龍圖騰網(wǎng)恭喜鄭州思昆生物工程有限公司申請的專利一種固定化模板多核苷酸配對(duì)末端測序方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115029424B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-16發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號(hào)為：202110234085.X，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6869；該發(fā)明授權(quán)一種固定化模板多核苷酸配對(duì)末端測序方法是由王亞文;王玲玲;孫潔設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2021-03-03向國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種固定化模板多核苷酸配對(duì)末端測序方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明涉及基因測序技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種固定化模板多核苷酸配對(duì)末端測序方法。本發(fā)明方法中第一端測序模板鏈固定化在芯片上，通過將第一端測序模板鏈的互補(bǔ)鏈直接連接在其3’端的方式，將互補(bǔ)鏈間接固定在芯片上，解除第一端測序模板鏈與互補(bǔ)鏈之間的雙鏈結(jié)構(gòu)，通過封堵第一端測序模板鏈的方式，避免互補(bǔ)鏈在復(fù)性環(huán)境與第一端測序模板鏈再雜交結(jié)合，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)以互補(bǔ)鏈為模板進(jìn)行第二端測序。整個(gè)測序方法的第二端測序的模板鏈直接連接在第一端測序模板鏈的位置，克服了傳統(tǒng)雙末端測序方法第二端測序重新成簇造成的簇有序性降低、簇范圍變大等導(dǎo)致的測序信號(hào)穩(wěn)定性差等技術(shù)缺陷。

本發(fā)明授權(quán)一種固定化模板多核苷酸配對(duì)末端測序方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種固定化多核苷酸模板配對(duì)末端測序方法，其特征在于，包括以下操作步驟：S1、提供固定在固體支持物上的陣列的單鏈模板多核苷酸，作為第一端測序模板鏈，加入第一測序引物，對(duì)單鏈模板多核苷酸至少部分序列進(jìn)行測序，獲得第一測序引物的延伸鏈和對(duì)應(yīng)的第一末端序列信息；S2：以第一端測序模板鏈為模板，形成與第一端測序模板鏈全長互補(bǔ)的多核苷酸鏈，稱為互補(bǔ)鏈；S3：將第一端測序模板鏈的3’端與互補(bǔ)鏈的5’端連接，解除第一端測序模板鏈和互補(bǔ)鏈的雙鏈雜交結(jié)構(gòu)，并封閉第一端測序模板鏈，阻止復(fù)性環(huán)境下互補(bǔ)鏈與第一端測序模板鏈重新雜交；S4：加入與互補(bǔ)鏈的3’端互補(bǔ)配對(duì)的第二測序引物，對(duì)互補(bǔ)鏈的至少部分序列進(jìn)行測序，獲得第二末端序列信息；步驟S2中形成互補(bǔ)鏈的具體方法為，第一測序引物的延伸鏈與第一端測序模板鏈解除雙鏈結(jié)構(gòu)，去除第一測序引物的延伸鏈，加入至少部分與第一端測序模板鏈的3’端互補(bǔ)的擴(kuò)增引物，以第一端測序模板鏈為模板，延伸擴(kuò)增引物形成與第一端測序模板鏈全長互補(bǔ)的多核苷酸鏈作為互補(bǔ)鏈；擴(kuò)增引物為莖環(huán)結(jié)構(gòu)，擴(kuò)增引物的3’莖部分具有凸出的單鏈區(qū)域，至少部分的凸出的單鏈區(qū)域與第一端測序模板鏈的3’端互補(bǔ)配對(duì)；步驟S3中第一端測序模板鏈的3’端與互補(bǔ)鏈的5’端連接的方法為：加入連接酶將擴(kuò)增引物5’端與第一端測序模板鏈的3’端連接；步驟S3中解除第一端測序模板鏈和互補(bǔ)鏈的雙鏈雜交結(jié)構(gòu)，并封閉第一端測序模板鏈的方法為：在變性條件下，第一端測序模板鏈和互補(bǔ)鏈解除雙鏈雜交結(jié)構(gòu)，形成長單鏈，之后加入僅與長單鏈的第一端測序模板鏈的3’端互補(bǔ)配對(duì)的第一延伸引物，第一延伸引物以第一端測序模板鏈為模板延伸形成與第一端測序模板鏈互補(bǔ)雜交的第一延伸引物鏈，封閉第一端測序模板鏈。

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