恭喜江西軒斛軒健康科技有限公司陳福祥獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜江西軒斛軒健康科技有限公司申請的專利一種酶解法制備鐵皮石斛肽的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119144685B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-05-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411587318.4,技術領域涉及:C12P21/06;該發明授權一種酶解法制備鐵皮石斛肽的方法是由陳福祥;王國鑫;王品凱;宋喜紅;吳俊穎設計研發完成,并于2024-11-08向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種酶解法制備鐵皮石斛肽的方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種酶解法制備鐵皮石斛肽的方法,通過酸性溶液促進酶解過程中鐵皮石斛蛋白與蛋白酶接觸,提高酶解效率,同時進一步促進蛋白酶進入底物顆粒內部,使肽鍵斷裂,產生更多小分子肽;通過特定的工藝方法在魔芋多糖載體表面引入雙鍵,使載體表面發生聚合反應,聚合物長鏈之間構建了柔性交聯橋,形成了交聯網絡,為酶解反應提供了一種以酶團聚體為中心的微環境,避免了鐵皮石斛蛋白團聚導致酶解不充分的問題,提高產物收率;結合分子篩層析柱實現分離過程中對酶解后的混合物中結構及物化性質微小差異的分子識別,集中分離出分子量較小的鐵皮石斛小分子肽,提高產品的生物活性。
本發明授權一種酶解法制備鐵皮石斛肽的方法在權利要求書中公布了:1.一種酶解法制備鐵皮石斛肽的方法,其特征在于:包括以下步驟:步驟一、鐵皮石斛葉于60℃烘箱烘干,干燥石斛葉經打粉機粉碎后過80目篩,得鐵皮石斛葉粉;步驟二、鐵皮石斛葉粉按照料液比1:25~31加入去離子水,超聲處理10min,加入鐵皮石斛葉粉重量4~8倍的酸性溶液,充分攪拌后繼續超聲處理30min,之后3500~5000rpm離心30min,取上清液過0.22μm濾膜即得鐵皮石斛水解液;步驟三、取34~58份魔芋精粉均勻分散于100~180份去離子水中,攪拌至魔芋精粉充分吸水溶脹為魔芋溶膠,加入18~22份苯丙烯醛,攪拌10~20min,再用氫氧化鈉調整pH值=10.0~11.0,80~90℃水浴保溫3h,靜置冷卻后,再加入30~60份環己甲醇,40~65℃浸泡處理24小時,加入16~23份堿性蛋白酶攪拌5~6h,即得固定堿性蛋白酶;步驟四、鐵皮石斛水解液加入固定堿性蛋白酶,酶解2h后,90℃水浴滅酶30min,冷卻后1500~2500rpm離心30min;步驟五、取離心后上清液上分子篩層析柱,用pH=7.2的0.01molL磷酸鹽緩沖液洗脫,流速為0.05mLmin,收集鐵皮石斛肽;其中,步驟二中,所述酸性溶液的制備方法:取4~8份次氯酸磷酸鈉溶于19~32份去離子水中,加入2~6份氯化鉻,70~110℃攪拌1.5h,得到混合物A;取38~43份十六烷基三甲基溴化銨,加入磷酸調整pH值=5.5~6.8,常溫攪拌活化0.5h;然后加入混合物A,超聲混合30min,得到所述酸性溶液;其中,步驟五中,所述分子篩層析柱的制備方法:1)、取4~6份亞甲雙壬基酚聚氧乙烯醚,加入30~40份去離子水和8~11份2molLHCl,攪拌溶解后,加入8.5~10份亞磷酸三苯酯,攪拌5~8h后,95℃烘干1d,在480℃空氣氣氛中焙燒6h,得到分子篩前體;2)、分子篩前體中加入46~57份2-苯基丙基三氯硅烷質量分數10%的甲苯溶液和5~9份對硝基-N,N-二甲基苯胺,60℃攪拌20h,冷卻后1500~3000rmin離心15min,沉淀用去離子水洗滌后真空干燥48h得到分子篩;3)、分子篩經pH=7.2的0.01molL磷酸鹽緩沖液浸泡5~8h后,裝入層析柱中,用上述磷酸鹽緩沖液平衡后即得所述分子篩層析柱。
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