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龍圖騰網(wǎng)獲悉內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)申請(qǐng)的專利一種測(cè)定酵母培養(yǎng)物中酵母β-葡聚糖含量的方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN119574753B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-02發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202510138623.3，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N30/02；該發(fā)明授權(quán)一種測(cè)定酵母培養(yǎng)物中酵母β-葡聚糖含量的方法是由劉大程;張小潔;徐子萱;云梓辰;劉世雄設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2025-02-08向國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本一種測(cè)定酵母培養(yǎng)物中酵母β-葡聚糖含量的方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種測(cè)定酵母培養(yǎng)物中酵母β?葡聚糖含量的方法，屬于化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，方法包括：預(yù)處理；總葡聚糖水解；α?葡聚糖水解；谷物β?葡聚糖水解；衍生化反應(yīng)；標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和測(cè)定。本發(fā)明方法具有高精密度、良好的重復(fù)性和可行性，對(duì)酵母培養(yǎng)物中酵母β?葡聚糖含量的準(zhǔn)確檢測(cè)具有參考價(jià)值。本發(fā)明方法將為酵母培養(yǎng)物的進(jìn)一步開發(fā)和制備提供參考，并為相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展提供更多有價(jià)值的科學(xué)依據(jù)。通過這種方法，我們可以更準(zhǔn)確地評(píng)估酵母培養(yǎng)物中酵母β?葡聚糖的含量，從而確保產(chǎn)品質(zhì)量的準(zhǔn)確性。

本發(fā)明授權(quán)一種測(cè)定酵母培養(yǎng)物中酵母β-葡聚糖含量的方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種測(cè)定酵母培養(yǎng)物中酵母β-葡聚糖含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：1預(yù)處理：將待測(cè)酵母培養(yǎng)物樣品、已知純度的酵母β-葡聚糖對(duì)照品和已知純度的谷物β-葡聚糖對(duì)照品粉碎后過篩，備用；2總葡聚糖水解：稱取預(yù)處理后的待測(cè)樣品和已知純度的酵母β-葡聚糖對(duì)照品，分別加入硫酸水溶液后進(jìn)行冰水浴，然后加入超純水進(jìn)行沸水浴，再用乙酸鈉緩沖液轉(zhuǎn)移沸水浴后的溶液至容量瓶中，再然后向容量瓶中加入氫氧化鈉水溶液進(jìn)行中和，最后用乙酸鈉緩沖液定容，取水解后的溶液進(jìn)行離心，收集上清液至離心管中，向離心管中加入外切-1，3-β-葡聚糖酶與β-葡萄糖苷酶的混懸液后進(jìn)行水浴加熱，得到樣品溶液A和對(duì)照品溶液A；α-葡聚糖水解：稱取預(yù)處理后的待測(cè)樣品和已知純度的酵母β-葡聚糖對(duì)照品，分別加入氫氧化鈉水溶液后進(jìn)行冰水浴，同時(shí)磁力攪拌，隨后加入乙酸鈉緩沖液混合，再加入淀粉葡糖苷酶與蔗糖酶的混懸液和海藻糖酶混懸液進(jìn)行水浴加熱，最后用超純水轉(zhuǎn)移水浴加熱后的溶液至容量瓶中并定容，取水解后的溶液進(jìn)行離心，收集上清液至離心管中，得到樣品溶液B和對(duì)照品溶液B；谷物β-葡聚糖水解：稱取預(yù)處理后的待測(cè)樣品和已知純度的谷物β-葡聚糖對(duì)照品，分別加入乙醇水溶液和磷酸鈉緩沖液后進(jìn)行沸水浴，然后進(jìn)行水浴加熱，再加入內(nèi)切-1,3-1,4-β-葡聚糖水解酶的混懸液，繼續(xù)水浴加熱，最后用乙酸鈉緩沖液轉(zhuǎn)移水浴加熱后的溶液至容量瓶中并定容，取水解后的溶液進(jìn)行離心，收集上清液至離心管，向離心管中加入β-葡萄糖苷酶的混懸液后進(jìn)行水浴加熱，得到樣品溶液C和對(duì)照品溶液C；3衍生化反應(yīng)：取步驟2得到的樣品溶液A、樣品溶液B、樣品溶液C、對(duì)照品溶液A、對(duì)照品溶液B、對(duì)照品溶液C，分別加入PMP-甲醇溶液和氫氧化鈉水溶液后進(jìn)行水浴加熱，然后加入鹽酸，再用三氯甲烷重復(fù)萃取多次，最后取上層水相進(jìn)行離心，收集上清液過膜，得到供試品溶液A、供試品溶液B、供試品溶液C、供試品溶液A對(duì)照、供試品溶液B對(duì)照和供試品溶液C對(duì)照；4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和測(cè)定：將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品加入超純水溶解，配制成1mgmL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃保存，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成濃度分別為0.5、5、10、50、100、400μgmL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配；將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別按照步驟3進(jìn)行衍生化反應(yīng)；將衍生化反應(yīng)后的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液和供試品溶液A、供試品溶液B、供試品溶液C、供試品溶液A對(duì)照、供試品溶液B對(duì)照和供試品溶液C對(duì)照分別采用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，高效液相色譜條件為：色譜柱：AcclaimTMC30，5μm4.6×250mm液相色譜柱；流動(dòng)相：濃度為0.1molL、pH為5.5的乙酸銨水溶液和乙腈的體積比為75:25的混合溶液；流速：1.0mLmin；柱溫：35℃；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長：254nm；進(jìn)樣量：10μL；對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的葡萄糖目標(biāo)峰進(jìn)行分析得到色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程，分別對(duì)供試品溶液A、供試品溶液B、供試品溶液C、供試品溶液A對(duì)照、供試品溶液B對(duì)照和供試品溶液C對(duì)照的葡萄糖目標(biāo)峰進(jìn)行分析得到色譜峰面積，通過線性回歸方程，計(jì)算出供試品溶液A、供試品溶液B、供試品溶液C、供試品溶液A對(duì)照、供試品溶液B對(duì)照和供試品溶液C對(duì)照的葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，根據(jù)公式1-11計(jì)算待測(cè)酵母培養(yǎng)物樣品中酵母β-葡聚糖的含量，計(jì)算公式為：XD＝XA-XB-XC1 X酵母對(duì)照-檢測(cè)值＝XA對(duì)照-XB對(duì)照7X谷物對(duì)照-檢測(cè)值＝XC對(duì)照8 式中：XD-待測(cè)酵母培養(yǎng)物樣品中酵母β-葡聚糖的含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；XA-供試品溶液A中總葡聚糖的含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；XB-供試品溶液B中α-葡聚糖的含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；XC-供試品溶液C中谷物β-葡聚糖的含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；XA對(duì)照-供試品溶液A對(duì)照中總葡聚糖的含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；XB對(duì)照-供試品溶液B對(duì)照中α-葡聚糖的含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；X酵母對(duì)照-檢測(cè)值-供試品溶液A對(duì)照中總葡聚糖的含量減去供試品溶液B對(duì)照中α-葡聚糖的含量，即供試品溶液A對(duì)照和供試品溶液B對(duì)照中檢測(cè)到的酵母β-葡聚糖含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；X谷物對(duì)照-檢測(cè)值-供試品溶液C對(duì)照中谷物β-葡聚糖的含量，即供試品溶液C對(duì)照中檢測(cè)到的谷物β-葡聚糖含量，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；XC對(duì)照-即X谷物對(duì)照-檢測(cè)值，供試品溶液C對(duì)照中谷物β-葡聚糖的含量，即以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，％；cA-供試品溶液A中葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μgmL；cB-供試品溶液B中葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μgmL；cC-供試品溶液C中葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μgmL；cA對(duì)照-供試品溶液A對(duì)照中葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μgmL；cB對(duì)照-供試品溶液B對(duì)照中葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μgmL；cC對(duì)照-供試品溶液C對(duì)照中葡萄糖色譜峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μgmL；mA-總葡聚糖水解稱取待測(cè)樣品的質(zhì)量，g；mB-α-葡聚糖水解稱取待測(cè)樣品的質(zhì)量，g；mC-谷物β-葡聚糖水解稱取待測(cè)樣品的質(zhì)量，g；mA對(duì)照-總葡聚糖水解稱取酵母β-葡聚糖對(duì)照品的質(zhì)量，g；mB對(duì)照-α-葡聚糖水解稱取酵母β-葡聚糖對(duì)照品的質(zhì)量，g；mC對(duì)照-谷物β-葡聚糖水解稱取谷物β-葡聚糖對(duì)照品的質(zhì)量，g；VA-總葡聚糖水解待測(cè)樣品定容體積，mL；VB-α-葡聚糖水解待測(cè)樣品定容體積，mL；VC-谷物β-葡聚糖水解待測(cè)樣品定容體積，mL；VA對(duì)照-總葡聚糖水解酵母β-葡聚糖對(duì)照品定容體積，mL；VB對(duì)照-α-葡聚糖水解酵母β-葡聚糖對(duì)照品定容體積，mL；VC對(duì)照-谷物β-葡聚糖水解谷物β-葡聚糖對(duì)照品定容體積，mL；F酵母-待測(cè)樣品在試驗(yàn)過程中總葡聚糖和α-葡聚糖被破壞或損耗造成的結(jié)果偏低的校正因子；F谷物-待測(cè)樣品在試驗(yàn)過程中谷物β-葡聚糖被破壞或損耗造成的結(jié)果偏低的校正因子；P酵母-酵母β-葡聚糖對(duì)照品的純度，％；P谷物-谷物β-葡聚糖對(duì)照品的純度，％；W酵母-酵母β-葡聚糖對(duì)照品的水分含量，％；W谷物-谷物β-葡聚糖對(duì)照品的水分含量，％；8.5-總葡聚糖水解或谷物β-葡聚糖水解收集上清液制備樣品溶液或?qū)φ掌啡芤海偌尤隤MP-甲醇溶液、氫氧化鈉水溶液和鹽酸后的上清液的體積稀釋倍數(shù)；4.25-α-葡聚糖水解收集上清液制備樣品溶液或?qū)φ掌啡芤海偌尤隤MP-甲醇溶液、氫氧化鈉水溶液和鹽酸后的上清液的體積稀釋倍數(shù)；0.9-將葡萄糖含量換算成葡聚糖含量的系數(shù)；XA對(duì)照、XB對(duì)照、XC對(duì)照和XD做多個(gè)重復(fù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果以多個(gè)重復(fù)測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，保留3位有效數(shù)字。

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